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• 线粒体是细胞发生呼吸作用的重要场所, 而呼吸作用主要包括氧化磷酸化和三羧酸循环两部分.线粒体氧化磷酸化的电子传递链又叫线粒体呼吸链, 位于线粒体内膜上, 由四个分子量很大的跨膜蛋白复合物(线粒体呼吸链膜蛋白复合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ)、介于Ⅰ、Ⅱ与Ⅲ之间的泛醌, 以及介于Ⅲ与Ⅳ之间的细胞色素c共同组成^[1].线粒体呼吸链的功能是进行生物氧化, 并与腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)合成酶相偶联, 共同完成氧化磷酸化过程, 并生产能量分子ATP.理论上, 抑制任何一个复合物的活性都将导致生物体不能正常合成ATP, 进而衰竭死亡, 并由此产生了不同类型作用于线粒体呼吸链的杀菌剂.其中, 复合物Ⅱ和Ⅲ在三羧酸循环和呼吸链电子传递过程中起着至关重要的作用, 是杀菌剂的重要作用靶标^[2].近年来, 关于复合物Ⅱ^[3~14]和Ⅲ为靶标的^{[5, 15~39]}抑制剂的工作相继被报道.琥珀酸-细胞色素c氧化还原酶(SCR)就是指复合物Ⅱ和Ⅲ的混合物, 它由两者共同组成^[40~42].

  由于二苯醚结构可以显著改善药物分子的理化性质, 主要集中表现在生物活性、生物活性谱、毒性、光稳定性等方面.所以, 在医药、农药等领域都有着广泛的应用, 特别是在农药领域中, 二苯醚结构单元被广泛应用于各种除草剂、杀虫剂及杀菌剂.如图 1所示, 日本盐野义制药公司所开发^[43]的植保杀菌剂苯氧菌胺(MetominoStrobin)和杜邦公司开发的主要用于防治卵菌纲的杀菌剂噁唑菌酮(Famoxadone)^[44].另外, 联苯胺是线粒体复合物Ⅱ为靶标的杀菌剂的重要活性结构片段.如图 1所示, 杀菌剂氟唑菌酰胺(Fluxapyroxad)^[45], 德国巴斯夫公司开发的新型烟酰胺类杀菌剂啶酰菌胺(Boscalid)^[46], 以及日本农药株式会社开发的吡嗪酰胺(Pyraziflumid)^[47]杀菌剂都含有联苯胺结构.在前期研究工作中, 我们设计并合成了一系列含二苯醚结构的三氮唑磺酰胺类衍生物, 该类化合物对猪心来源的SCR具有较好的抑制活性^[12].进一步的研究表明:该类化合物中二苯醚结构单元能与活性腔周围的氨基酸残基形成较强的π-π堆积作用.因此, 本工作希望保留二苯醚结构单元, 将难以合成的三氮唑磺酰胺片段改造为含芳环的联苯胺结构.另一方面, 为了更好地匹配酶活性腔的狭长通道, 我们在目标分子中引入4-联苯胺结构.因此, 本文采用活性亚结构拼接的方法将二苯醚活性结构单元引入到联苯胺的结构中, 设计了一系列未见文献报道的新型含二苯醚结构的联苯胺类化合物(如图 2所示).

  图 1

  

  图 1.  商品化复合物Ⅱ或复合物Ⅲ类杀菌剂

  Figure 1.  Commercialized fungicides of complexes Ⅱ or Ⅲ

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  图 2

  

  图 2.  目标化合物的设计

  Figure 2.  Design of the target compounds

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  1.   结果与讨论

  我们在前期工作中合成了一系列对SCR具有良好的抑制活性的二苯醚三氮唑磺酰胺类衍生物, 分子中的二苯醚片段与活性腔的相关氨基酸残基形成了较强的π-π堆积作用, 是起到关键作用的结构单元.因此, 本工作希望保留二苯醚结构单元, 在目标分子中引入联苯胺结构以代替结构复杂的三氮唑磺酰胺片段.此外, 在所设计的目标分子中引入4-联苯胺结构, 希望更好地匹配酶活性腔的狭长通道.目标化合物的合成路线如Scheme 1所示.再利用核磁共振波谱(NMR)及高分辨质谱(HRMS)对目标化合物的结构进行了表征, 测试了所合成的目标化合物对SCR的抑制活性.结果表明该类化合物均对SCR具有一定抑制效果, 其中, 目标化合物3o的活性最好, 在10 µmol•L^-1的浓度下对SCR的抑制率为46.44%.

  图式 1

  

  图式 1.  目标化合物的合成路线

  Scheme 1.  Route of the target compounds

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  1.1   反应条件的筛选

  以铜促进的4-氨基二苯醚(1a)和4-联苯硼酸(2a)的反应为模板反应, 进行了一系列条件筛选(表 1).从表 1数据可知, 当以醋酸铜(1 mmol)为促进剂, 碳酸钾(2 mmol)为碱, DMF (5 mL)为溶剂, 常温条件下反应60 h得到65%的目标化合物3a (Entry 1).进一步考察了不同铜盐对反应的影响, 结果表明:大多数筛选的铜盐均没有任何反应效果, 只有Cu(OAc)₂•H₂O和Cu(OAc)₂可以促进反应的进行, 其中Cu(OAc)₂的效果最好(Entries 2~8).接下来筛选了几种常见的有机及无机碱(Entries 9~11).当碱为Et₃N时, 收率有较大幅度的提高, 达到了75% (Entry 11).之后, 考察了溶剂对反应的影响(Entries 12, 13), 其中MeCN最有利于反应的进行, 收率达到了90% (Entry 13).最后, 考察了铜盐的量对反应的影响(Entries 14~16).当铜盐的量减少时, 其收率逐渐降低, 当降至0.1 equiv.时, 反应收率较低, 只有30% (Entry 16).确定模板反应的最佳条件为: 1.00 equiv. 4-联苯硼酸, 1.00 equiv.二苯醚胺, 1.00 equiv.的醋酸铜, MeCN为溶剂, 2.00 equiv.的三乙胺作为碱(Entry 13).

  表 1

  

  表 1  反应条件的优化

  Table 1.  Optimization of the reaction conditions

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  Entry	[Cu](equiv.)	Base(equiv.)	Solvent	Time/h	Yielda/%
  1	Cu(OAc)2 (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	65
  2	Cu(OAc)2•H2O (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	58
  3	CuCl2 (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	Trace
  4	CuCl2•2H2O (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	Trace
  5	CuBr2 (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	Trace
  6	CuCl (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	Trace
  7	CuBr (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	Trace
  8	CuI (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	Trace
  9	Cu(OAc)2 (1.00)	Cs2CO3 (2.00)	DMF	60	Trace
  10	Cu(OAc)2 (1.00)	Pyridine (2.00)	DMF	60	Trace
  11	Cu(OAc)2 (1.00)	Et3N (2.00)	DMF	48	75
  12	Cu(OAc)2 (1.00)	Et3N (2.00)	DCM	48	84
  13	Cu(OAc)2 (1.00)	Et3N (2.00)	MeCN	48	90
  14	Cu(OAc)2 (0.50)	Et3N (2.00)	MeCN	72	70
  15	Cu(OAc)2 (0.25)	Et3N (2.00)	MeCN	72	65
  16	Cu(OAc)2 (1.00)	Et3N (2.00)	MeCN	72	30
  aIsolated yields.

  1.2   目标化合物的合成及生物活性测试

  在上述最优反应条件下, 尝试合成了一系列目标化合物(表 2).为了便于讨论, 将二苯醚左边的苯环指定为A环, 右边苯环指定为B环.首先, 考察了A环上不同取代基对反应的影响(表 2, Entries 2~5), 当在A环4位上引入吸电子基团Br时(Entry 2), 以76%的收率得到目标化合物.还进一步考察在A环2位和4位上引入不同取代基对反应的影响, 当2位上引入Cl或Br时, 4位上引入Cl或CF₃时都能以中等偏上的收率得到相应的目标化合物(Entries 3~5).接着考察了B环上引入取代基对反应的影响, 当在B环2位上引入吸电子基团Cl时, 以94%的收率得到目标化合物(Entry 6).在Entry 6的基础上, 在A环2位和4位上分别引入Cl、Me、Br、CF₃、萘环等不同取代基进一步考察对该反应的影响, 都能以中等的收率得到相应的目标化合物(Entries 7~12).当在B环2位上引入吸电子基团F时, 在A环2位和4位上分别引入Cl、Me、CF₃, 也都能以中等偏上的收率顺利得到相应的目标化合物(Entries 13~15).另外, 考察了在A环2、4、6位上分别引入Cl、萘环和取代萘环, 都能以中等收率得到相应目标化合物(Entries 16~18);紧接着在B环2位和6位上均引入吸电子基团Cl时, 并在A环2位和4位上分别引入Cl、萘环或取代萘环(Entries 19~22), 也能顺利得到目标化合物.当B环2位和6位上引入吸电子基团F, 并在A环2位和4位上分别引入Cl、Me、Br、CF₃、萘环或取代萘环时(Entries 23~27), 也都能以较好的收率得到相应目标化合物.

  表 2

  

  表 2  目标化合物的合成及其生物活性测试^a

  Table 2.  Synthesis of the target compounds and biological activity

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  Entry	Compd.	R1	R2	Yield a/%	Ib/%
  1	3a	H	H	90	30.42
  2	3b	4-Br	H	76	36.95
  3	3c	2, 4-Cl2	H	71	36.09
  4	3d	2-Cl-4-CF3	H	86	39.01
  5	3e	2-Br-4-Cl	H	74	32.16
  6	3f	2, 4, 6-Cl3	2-Cl	94	13.72
  7	3g	2, 4-Cl2	2-Cl	69	6.30
  8	3h	2-Me-4-Cl	2-Cl	67	12.71
  9	3i	2-Cl-4-CF3	2-Cl	74	24.47
  10	3j	2-Br-4-Cl	2-Cl	68	6.81
  11	3k	2-Naphthylc	2-Cl	76	5.73
  12	3l	1-Br-2-naphthylc	2-Cl	70	1.91
  13	3m	2, 4-Cl2	2-F	75	37.70
  14	3n	2-Me-4-Cl	2-F	95	37.39
  15	3o	2-Cl-4-CF3	2-F	73	46.44
  16	3p	2, 4, 6-Cl3	2-F	70	16.02
  17	3q	2-Naphthylc	2-F	65	20.59
  18	3r	1-Br-2-naphthylc	2-F	76	7.62
  19	3s	2, 4-Cl2	2, 6-Cl2	50	4.07
  20	3t	2-Br-4-Cl	2, 6-Cl2	54	10.07
  21	3u	2-Naphthylc	2, 6-Cl2	78	26.09
  22	3v	1-Br-2-naphthylc	2, 6-Cl2	71	3.74
  23	3w	2, 4-Cl2	2, 6-F2	81	38.96
  24	3x	4-Cl-2-Me	2, 6-F2	68	37.78
  25	3y	2-Br-4-Cl	2, 6-F2	62	43.25
  26	3z	2-Naphthylc	2, 6-F2	61	43.20
  27	3a'	1-Br-2-naphthylc	2, 6-F2	68	10.23
  28	嘧菌酯d				95.95
  aIsolated yields; binhibition rates at the concentration of 10 µmol/L; cthe whole ring A as this group; das a positive control.

  测试了所合成的目标化合物对SCR的抑制活性(表 2).结果表明: 3a对猪心来源的SCR的抑制活性为30.42%, 当在A环4位上引入吸电子基团Br时, 或在A环2位和4位上引入不同取代基时, 抑制活性略有提高(Entries 2~5).当在B环2位上引入吸电子基团Cl, 且在A环2位和4位上引入不同取代基或萘环时, 所得化合物对SCR的抑制活性有不同程度的降低(Entries 6~12).当在B环2位上引入吸电子基团F, 且在A环2位和4位上引入卤素取代基时, 活性略有提高(Entries 13~16), 但引入萘环后活性明显降低(Entries 17, 18).在B环2位和6位上引入吸电子基团Cl, 且在A环2位和4位上引入不同取代基时, 活性有明显的下降(Entries 19~22).在B环2位和6位上引入吸电子基团F, 且在A环2位和4位上引入不同取代基时, 活性略有提高(Entries 23~25), 然而萘环或取代萘环的引入导致活性的降低(Entries 26, 27).

  2.   结论

  本文采用活性亚结构拼接的方法将二苯醚活性结构单元引入到联苯胺的结构中, 利用铜促进二苯醚胺和联苯硼酸的Chan-Lam反应, 成功合成了27个未见文献报道的含有二苯醚结构的联苯胺类衍生物.该反应具有选择性好、反应条件温和、底物适应性好、原料易得等优点.最后, 测试了该系列化合物对猪心来源的SCR的抑制活性.结果表明:绝大多数化合物对SCR具有一定的抑制效果, 其中目标化合物3o在10 µmol•L^-1浓度下的抑制率为46.44%, 说明该类结构具有进一步的研究价值.

  3.   实验部分

  3.1   仪器与试剂

  ¹H NMR, ¹³C NMR谱图数据由Bruker Avance 500核磁共振仪(TMS为内标、氘代氯仿、氘代DMSO为溶剂), 高分辨质谱数据由Bruker Daltonics microTOF-QII质谱仪测定; 熔点由Büchi M560数字熔点仪(温度未经校正)测定.此外, 合成过程中用到的仪器有:德国Heidolph MR3001型恒温加热磁力搅拌器、瑞士Büchi R-200型旋转蒸发仪、德国Sartoruis电子天平、ZF-200暗箱式紫外分析仪、DLSB低温冷却循环泵、SHZ-D (Ⅲ)循环水式真空泵、70-1型远红外线干燥箱、Zk-82BB型电热真空干燥箱和KQ-100DZ型数控超声波清洗仪等.柱层析所用硅胶及点样硅胶板为青岛海洋化工有限公司生产, 型号200~300目.所使用石油醚沸程为60~90 ℃; 其它试剂和溶剂如无特殊说明, 均为分析纯或化学纯.

  3.2   实验方法

  在25 mL的茄形瓶中依次加入1.00 mmol 4-联苯硼酸, 1.00 mmol二苯醚胺类化合物, 1.00 mmol醋酸铜, 然后加入5 mL的MeCN, 最后加入2.00 mmol三乙胺在常温下进行反应.薄层色谱(TLC)监测反应的进程, 反应完全后, 将少量水加入体系中, 并用乙酸乙酯(15 mL×3)萃取, 合并有机层, 无水硫酸钠干燥, 旋转蒸发仪脱去溶剂, 柱层析分离得到相应的目标化合物3a~3a'.

  3.3   目标化合物的表征

  N-(4-苯氧基苯基)-[1, 1'-联苯]-4-胺(3a): 303.7 mg白色固体, 收率90%. m.p. 136.8~136.9 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.56 (d, J＝7.6 Hz, 2H), 7.49 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 7.41 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 2H), 7.35~7.26 (m, 3H), 7.11 (d, J＝8.6 Hz, 2H), 7.09~7.03 (m, 3H), 7.03~6.95 (m, 4H), 5.68 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 158.10, 151.45, 143.37, 140.85, 138.44, 133.27, 129.66, 128.71, 128.00, 126.52, 126.47, 122.69, 120.65, 120.49, 118.00, 116.86. HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₂₀NO [M+ H]⁺ 338.15394, found 338.15428.

  N-[4-(4-溴苯氧基)苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3b): 316.4 mg白色固体, 收率76%. m.p. 154.9~155.7 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.56 (d, J＝7.6 Hz, 2H), 7.50 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.41 (dd, J＝7.8, 5.8 Hz, 4H), 7.29 (dd, J＝7.4, 7.2 Hz, 1H), 7.11 (d, J＝8.7 Hz, 2H), 7.08 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 6.96 (d, J＝8.7 Hz, 2H), 6.87 (d, J＝8.8 Hz, 2H), 5.70 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 157.44, 150.73, 143.06, 140.80, 139.00, 133.54, 132.56, 128.73, 128.03, 126.58, 126.49, 120.65, 120.35, 119.54, 117.13, 114.97. HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₁₉BrNO [M+H]⁺ 416.06445, found 416.06502.

  N-[4-(2, 4-二氯苯氧基)苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3c): 288.5 mg白色固体, 收率71%. m.p. 96.3~97.5 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.56 (d, J＝7.5 Hz, 2H), 7.50 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 7.45 (d, J＝2.5 Hz, 1H), 7.41 (dd, J＝7.8, 7.6 Hz, 2H), 7.29(dd, J＝7.4, 7.3 Hz, 1H), 7.16 (dd, J＝8.8, 2.5 Hz, 1H), 7.13~7.05 (m, 4H), 6.94 (dd, J＝6.0, 5.8 Hz, 2H), 6.87 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 5.69 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 152.38, 150.66, 143.00, 140.78, 139.08, 133.58, 130.37, 128.73, 128.36, 128.03, 127.88, 126.59, 126.49, 125.71, 120.32, 120.00, 119.82, 117.17. HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₁₈Cl₂NO [M+H]⁺ 406.07600, found 406.07632.

  N-{4-[2-氯-4-(三氟甲基)苯氧基]苯基}-[1, 1'-联苯]-4-胺(3d): 378.3 mg白色固体, 收率86%. m.p. 97.7~98.6 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.72 (d, J＝1.9 Hz, 1H), 7.58~7.53 (m, 2H), 7.52 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 7.45~7.39 (m, 3H), 7.30 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.17~7.10 (m, 4H), 7.02~6.98 (m, 2H), 6.94 (d, J＝8.6 Hz, 1H), 5.76 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 156.89, 149.25, 142.63, 140.75, 140.09, 134.00, 128.75, 128.08, 128.03 (q, J＝3.7 Hz), 126.68, 126.54, 125.50 (q, J＝33.3 Hz), 124.99 (q, J＝3.6 Hz), 124.51, 120.99, 120.43 (q, J＝271.3 Hz), 119.91, 117.63, 117.56. HRMS (ESI) calcd for C₂₅H₁₈ClF₃NO [M+H]⁺ 440.10235, found 440.10287.

  N-[4-(2-溴-4-苯氧基)苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3e): 333.6 mg白色固体, 收率74%. m.p. 106.5~107.3 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.61 (d, J＝2.5 Hz, 1H), 7.58~7.53 (m, 2H), 7.50 (d, J＝8.6 Hz, 2H), 7.41 (dd, J＝7.8, 7.6 Hz, 2H), 7.29 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.20 (dd, J＝8.8, 2.5 Hz, 1H), 7.15~7.03 (m, 4H), 6.96~6.90 (m, 2H), 6.84 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 5.70 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 153.57, 150.61, 142.96, 140.76, 139.13, 133.58, 133.17, 128.72, 128.54, 128.02, 126.59, 126.48, 120.28, 119.99, 119.67, 117.18, 114.38. HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₁₈BrClNO [M+H]⁺ 450.02548, found 450.02638.

  N-[3-氯-4-(2, 4, 6-三氯苯氧基)苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3f): 390.3 mg白色固体, 收率94%. m.p. 129.4~130.7 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.56 (d, J＝7.3 Hz, 3H), 7.50 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 7.45~7.38 (m, 4H), 7.30 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.06 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 6.84 (dd, J＝8.8, 2.7 Hz, 1H), 6.39 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 5.64 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 146.76, 146.50, 142.35, 140.68, 138.86, 134.10, 131.19, 130.37, 129.14, 128.74, 128.09, 126.69, 126.53, 123.38, 120.83, 117.72, 117.62, 115.09. HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₁₆Cl₄- NO [M+H]⁺ 473.99805, found 473.99937.

  N-[3-氯-4-(2, 4-二氯苯氧基)苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3g): 304.1 mg白色固体, 收率69%. m.p. 118.4~119.7 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.60~7.50 (m, 4H), 7.48~7.40 (m, 3H), 7.32 (dd, J＝7.4, 7.2 Hz, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.13 (d, J＝8.2 Hz, 3H), 6.94 (dd, J＝16.7, 8.7 Hz, 2H), 6.70 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 152.22, 144.90, 141.56, 141.09, 140.58, 134.84, 131.62, 130.40, 128.78, 128.17, 127.74, 126.83, 126.60, 125.15, 124.64, 122.19, 119.34, 118.57, 118.04, 117.24. HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₁₇Cl₃- NO [M+H]⁺ 440.03702, found 440.03731.

  N-[3-氯-4-(4-氯-2-甲基苯氧基)苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3h): 281.6 mg白色固体, 收率67%. m.p. 104.2~105.2 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.57 (d, J＝7.6 Hz, 2H), 7.53 (d, J＝8.2 Hz, 2H), 7.42 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 2H), 7.32 (d, J＝7.0 Hz, 1H), 7.22 (s, 2H), 7.11 (d, J＝8.2 Hz, 2H), 7.06 (d, J＝8.7 Hz, 1H), 6.97~6.91 (m, 1H), 6.85 (d, J＝8.7 Hz, 1H), 6.62 (d, J＝8.6 Hz, 1H), 5.70 (s, 1H), 2.32 (s, 3H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 154.19, 146.13, 142.00, 140.63, 140.03, 134.43, 131.04, 130.07, 128.76, 128.13, 127.77, 126.76, 126.69, 126.56, 126.31, 121.42, 119.92, 118.06, 117.70, 117.36, 16.10..HRMS (ESI) calcd for C₂₅H₂₀Cl₂NO [M+H]⁺ 420.09165, found 420.09172.

  N-{3-氯-4-[2-氯-4-(三氟甲基)苯氧基]苯基}-[1, 1'-联苯]-4-胺(3i): 351.0 mg白色固体, 收率74%. m.p. 149.2~150.5 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.73 (d, J＝1.9 Hz, 1H), 7.60~7.53 (m, 4H), 7.48~7.37 (m, 3H), 7.32 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.22 (d, J＝2.5 Hz, 1H), 7.16 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 7.05~6.96 (m, 2H), 6.76 (d, J＝8.6 Hz, 1H), 5.79 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 156.28, 143.69, 141.96, 141.23, 140.53, 135.17, 128.80, 128.20, 128.06 (q, J＝3.7 Hz), 127.46, 126.90, 126.62, 125.47 (q, J＝33.4 Hz), 124.93 (q, J＝3.7 Hz), 123.41 (q, J＝270.0 Hz), 123.69, 123.29, 118.97, 118.90, 116.96, 115.94. HRMS (ESI) calcd for C₂₅H₁₇Cl₂F₃NO [M+H]⁺ 474.06338, found 474.06383.

  N-[4-(2-溴-4-氯苯氧基)-3-氯苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3j): 330.0 mg白色固体, 收率68%. m.p. 133.7~134.5 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.62 (d, J＝2.3 Hz, 1H), 7.59~7.54 (m, 3H), 7.54 (s, 1H), 7.43 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 2H), 7.32 (dd, J＝7.4, 7.2 Hz, 1H), 7.22 (d, J＝2.3 Hz, 1H), 7.18 (dd, J＝8.8, 2.3 Hz, 1H), 7.14 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.01~6.91 (m, 2H), 6.67 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 153.33, 144.93, 141.56, 141.16, 140.59, 134.87, 133.24, 128.78, 128.42, 128.33, 128.18, 126.95, 126.84, 126.61, 122.38, 119.33, 118.60, 117.73, 117.23, 113.24. HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₁₇BrCl₂NO [M+H]⁺ 483.98651, found 483.98435.

  N-[3-氯-4-(萘-2-基-氧基)苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3k): 320.7 mg白色固体, 收率76%. m.p. 128.2~130.2 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.82 (dd, J＝9.2, 9.0 Hz, 2H), 7.68 (d, J＝8.1 Hz, 1H), 7.58 (d, J＝7.7 Hz, 2H), 7.55 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.46~7.40 (m, 3H), 7.38 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.34~7.23 (m, 3H), 7.19~7.10 (m, 3H), 7.05 (d, J＝8.7 Hz, 1H), 6.99 (dd, J＝8.7, 2.4 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 155.81, 145.63, 141.87, 140.65, 140.62, 134.58, 134.25, 129.87, 128.77, 128.15, 127.72, 127.34, 127.03, 126.77, 126.59, 126.54, 124.44, 123.02, 119.56, 118.62, 118.32, 117.56, 111.34. HRMS (ESI) calcd for C₂₈H₂₁ClNO [M+H]⁺ 422.13062, found 422.13084.

  N-{4-[(1-溴萘-2-基)氧基]-3-氯苯基}-[1, 1'-联苯]-4-胺(3l): 350.6 mg白色固体, 收率70%. m.p. 135.9~136.9 ℃, ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 8.30 (d, J＝8.5 Hz, 1H), 7.80 (d, J＝8.1 Hz, 1H), 7.74 (d, J＝8.9 Hz, 1H), 7.61 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.56 (d, J＝7.5 Hz, 2H), 7.52 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.46 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.41 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 2H), 7.30 (dd, J＝7.4, 7.2 Hz, 1H), 7.23 (s, 1H), 7.10 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.05 (d, J＝8.9 Hz, 1H), 6.92 (dd, J＝8.7, 2.3 Hz, 1H), 6.87 (d, J＝8.7 Hz, 1H), 5.70 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 151.79, 146.17, 141.92, 140.62, 140.28, 134.45, 133.19, 131.05, 129.01, 128.75, 128.15, 128.10, 127.89, 126.74, 126.60, 126.54, 126.32, 125.40, 121.39, 119.78, 118.17, 118.03, 117.58, 111.31. HRMS (ESI) calcd for C₂₈H₂₀BrClNO [M+H]⁺ 500.04113, found 500.04210.

  N-[4-(2, 4-二氯苯氧基)-3-氟苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3m): 318.2 mg白色固体, 收率75%. m.p. 108.6~109.0 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.57 (d, J＝7.3 Hz, 2H), 7.54 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 7.46~7.40 (m, 3H), 7.32 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.18~7.13 (m, 2H), 7.12 (d, J＝2.5 Hz, 1H), 7.02~6.92 (m, 2H), 6.84~6.79 (m, 1H), 6.76 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 5.79 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 154.56 (d, J＝248.8 Hz), 152.61, 141.50 (d, J＝15.5 Hz), 141.43, 140.57, 135.97 (d, J＝12.4 Hz), 134.93, 130.33, 128.78, 128.15, 127.98, 127.71, 126.85, 126.60, 124.34, 122.92 (d, J＝2.0 Hz), 118.74, 117.52, 113.46 (d, J＝3.1 Hz), 106.03 (d, J＝21.4 Hz). HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₁₇Cl₂FNO [M+H]⁺ 424.06657, found 424.06716.

  N-[4-(4-氯-2-甲基苯氧基)-3-氟苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3n): 383.7 mg白色固体, 收率95%. m.p. 108.5~109.5 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.57 (d, J＝7.5 Hz, 2H), 7.53 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.42 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 2H), 7.31 (dd, J＝7.4, 7.2 Hz, 1H), 7.20 (d, J＝2.0 Hz, 1H), 7.13 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.06 (dd, J＝8.6, 2.3 Hz, 1H), 6.96 (dd, J＝12.3, 2.4 Hz, 1H), 6.91 (dd, J＝8.8, 8.6 Hz, 1H), 6.80 (d, J＝8.7 Hz, 1H), 6.66 (d, J＝8.7 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H), 2.33 (s, 3H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 154.68, 154.52 (d, J＝248.1 Hz), 141.85, 140.63, 140.48 (d, J＝9.0 Hz), 137.28 (d, J＝12.0 Hz), 134.57, 130.95, 129.74, 128.77, 128.13, 127.55, 126.78, 126.64, 126.58, 122.40 (d, J＝2.5 Hz), 118.29, 116.70, 113.83 (d, J＝3.0 Hz), 106.56 (d, J＝21.5 Hz), 16.05. HRMS (ESI) calcd for C₂₅H₂₀ClFNO [M+H]⁺ 404.12120, found 404.12150.

  N-{4-[2-氯-4-(三氟甲基)苯氧基]-3-氟苯基}-[1, 1'-联苯]-4-胺(3o): 334.2 mg白色固体, 收率73%. m.p. 130.1~130.6 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.72 (d, J＝1.8 Hz, 1H), 7.57 (dd, J＝8.4, 8.2 Hz, 4H), 7.47~7.38 (m, 3H), 7.32 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.17 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 7.06 (dd, J＝9.0, 8.8 Hz, 1H), 6.97 (dd, J＝12.2, 2.6 Hz, 1H), 6.84 (dd, J＝8.7, 2.9 Hz, 2H), 5.83 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 156.60, 154.76 (d, J＝249.4 Hz), 142.35 (d, J＝9.1 Hz), 141.14, 140.53, 135.24, 134.74 (d, J＝12.5 Hz), 128.80, 128.19, 128.01 (q, J＝3.8 Hz), 126.91, 126.63, 125.47 (q, J＝33.4 Hz), 124.96 (q, J＝3.6 Hz), 123.71 (d, J＝1.9 Hz), 123.51, 123.40 (q, J＝270.0 Hz), 119.10, 115.59, 113.29 (d, J＝3.0 Hz), 105.66 (d, J＝21.5 Hz). HRMS (ESI) calcd for C₂₅H₁₇ClF₄NO [M+H]⁺458.09293, found 458.09328.

  N-[3-氟-4-(2, 4, 6-三氯苯氧基)苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3p): 321.1 mg白色固体, 收率70%. m.p. 114.9~116.0 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.58~7.53 (m, 2H), 7.50 (dd, J＝5.8, 5.6 Hz, 2H), 7.42 (d, J＝7.5 Hz, 2H), 7.40 (s, 2H), 7.30 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.07 (dd, J＝5.8, 5.6 Hz, 2H), 6.98 (dd, J＝12.5, 2.6 Hz, 1H), 6.72~6.67 (m, 1H), 6.51 (dd, J＝9.0, 8.8 Hz, 1H), 5.67 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 152.32 (d, J＝247.5 Hz), 146.63, 142.15, 140.66, 139.15 (d, J＝8.8 Hz), 138.67 (d, J＝11.6 Hz), 134.23, 131.03, 130.25, 129.11, 128.74, 128.08, 126.71, 126.54, 117.85, 116.63 (d, J＝2.0 Hz), 113.71 (d, J＝3.2 Hz), 107.23 (d, J＝21.0 Hz). HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₁₆Cl₃FNO [M+H]⁺ 458.02760, found 458.02802.

  N-[3-氟-4-(萘-2-氧基)苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3q): 263.6 mg白色固体, 收率65%. m.p. 127.9~128.1 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.87~7.79 (m, 2H), 7.70 (d, J＝8.2 Hz, 1H), 7.60 (d, J＝7.5 Hz, 2H), 7.57 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.50~7.42 (m, 3H), 7.39 (dd, J＝7.4, 7.2 Hz, 1H), 7.37~7.30 (m, 2H), 7.21 (d, J＝1.7 Hz, 1H), 7.18 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.10 (dd, J＝9.0, 8.8 Hz, 1H), 7.01 (dd, J＝12.2, 2.5 Hz, 1H), 6.86 (d, J＝8.6 Hz, 1H), 5.79 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 156.19, 155.13 (d, J＝248.4 Hz), 141.74, 141.00 (d, J＝9.1 Hz), 140.62, 136.60 (d, J＝12.3 Hz), 134.62, 134.24, 129.85, 129.79, 128.76, 128.10, 127.70, 127.00, 126.77, 126.57, 126.52, 124.38, 123.64 (d, J＝2.4 Hz), 118.48, 118.35, 113.71 (d, J＝3.0 Hz), 110.81, 106.31 (d, J＝21.7 Hz). HRMS (ESI) calcd for C₂₈H₂₁FNO [M+H]⁺ 406.16017, found 406.16030.

  N-{4-[(1-溴萘-2-基)氧基]-3-氟苯基}-[1, 1'-联苯]-4-胺(3r): 368.1 mg白色固体, 收率76%. m.p. 128.2~128.9 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 8.30 (d, J＝8.5 Hz, 1H), 7.80 (d, J＝8.1 Hz, 1H), 7.75 (d, J＝8.9 Hz, 1H), 7.65~7.59 (m, 1H), 7.57 (dd, J＝8.2, 0.9 Hz, 2H), 7.53 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 7.46 (dd, J＝11.1, 4.0 Hz, 1H), 7.42 (dd, J＝7.8, 7.6 Hz, 2H), 7.31 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.13 (d, J＝8.6 Hz, 2H), 7.11 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 7.01~6.92 (m, 2H), 6.79 (dd, J＝8.7, 1.3 Hz, 1H), 5.75 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 154.44 (d, J＝248.4 Hz), 152.11, 141.77, 140.70 (d, J＝9.0 Hz), 140.62, 137.35 (d, J＝12.1 Hz), 134.61, 133.15, 131.00, 128.99, 128.76, 128.14, 128.12, 127.90, 126.78, 126.60, 126.58, 125.35, 122.28 (d, J＝2.1 Hz), 118.37, 117.56, 113.74 (d, J＝3.1 Hz), 110.85, 106.44 (d, J＝21.4 Hz). HRMS (ESI) calcd for C₂₈H₂₀BrFNO [M+H]⁺ 484.07068, found 484.07195.

  N-[3, 5-二氯-4-(2, 4-二氯苯氧基)苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3s): 237.6 mg白色固体, 收率50%. m.p. 182.2~183.8 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.58 (d, J＝8.4 Hz, 4H), 7.50~7.42 (m, 3H), 7.34 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.19 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.09 (dd, J＝8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.07 (s, 2H), 6.49 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 5.81 (s, 1H). ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 151.62, 142.46, 140.38, 140.13, 139.59, 136.17, 130.42, 129.99, 128.83, 128.32, 127.54, 127.50, 127.08, 126.70, 123.35, 120.15, 116.38, 115.04. HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₁₆Cl₄NO [M+H]⁺ 473.99805, found 473.99877.

  N-[4-(2-溴-4-氯苯氧基)-3-氯苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3t): 280.6 mg白色固体, 收率54%. m.p. 183.5~184.6 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.62 (d, J＝2.4 Hz, 1H), 7.58 (d, J＝8.3 Hz, 4H), 7.44 (dd, J＝7.8, 7.6 Hz, 2H), 7.34 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.18 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.14 (dd, J＝8.8, 2.4 Hz, 1H), 7.06 (s, 2H), 6.46 (d, J＝8.8 Hz, 1H), 5.81 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 152.57, 142.46, 140.37, 140.13, 139.72, 136.16, 133.26, 130.00, 128.83, 128.32, 128.19, 127.81, 127.08, 126.70, 120.13, 116.37, 114.82, 111.85. HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₁₆BrCl₃NO [M+H]⁺ 517.94754, found 517.94743.

  N-[3, 5-二氯-4-(萘-2-基-氧基)苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3u): 356.0 mg白色固体, 收率78%. m.p. 158.6~159.2 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.83 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 7.80 (d, J＝8.1 Hz, 1H), 7.67 (d, J＝8.2 Hz, 1H), 7.59 (d, J＝8.3 Hz, 4H), 7.47~7.40 (m, 3H), 7.39~7.31 (m, 2H), 7.29 (dd, J＝8.9, 2.5 Hz, 1H), 7.21 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 7.12 (s, 2H), 6.99 (d, J＝2.4 Hz, 1H), 5.81 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 155.18, 141.90, 140.48, 140.45, 140.26, 135.84, 134.20, 130.39, 129.90, 129.79, 128.82, 128.30, 127.99, 127.74, 127.01, 126.69, 126.52, 124.27, 119.83, 117.42, 116.74, 109.00. HRMS (ESI) calcd for C₂₈H₂₀Cl₂NO [M+H]⁺ 456.09165, found 456.09226.

  N-{4-[(1-溴萘-2-基)氧基]-3, 5-二氯苯基}-[1, 1'-联苯]-4-胺(3v): 380.0 mg白色固体, 收率71%. m.p. 211.1~211.8 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 8.32 (d, J＝8.6 Hz, 1H), 7.78 (d, J＝8.1 Hz, 1H), 7.70 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 7.63~7.60 (m, 1H), 7.58 (d, J＝8.3 Hz, 4H), 7.44 (dd, J＝7.8, 7.6 Hz, 3H), 7.33 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.19 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 7.09 (s, 2H), 6.81 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 5.81 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 151.57, 142.20, 140.43, 140.35, 140.31, 135.99, 133.30, 130.59, 130.32, 128.82, 128.75, 128.30, 128.11, 127.92, 127.04, 126.69, 126.40, 124.96, 119.97, 116.58, 114.40, 108.62. HRMS (ESI) calcd forC₂₈H₁₉BrCl₂NO [M+H]⁺ 534.00216, found 534.00266.

  N-[4-(2, 4-二氯苯氧基)-3, 5-二氟苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3w): 358.3 mg白色固体, 收率81%. m.p. 120.9~122.4 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.58 (d, J＝8.2 Hz, 4H), 7.47~7.40 (m, 3H), 7.34 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.19 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 7.11 (dd, J＝8.8, 2.5 Hz, 1H), 6.73~6.64 (m, 3H), 5.85 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 156.39 (dd, J＝249.2, 6.7 Hz), 152.63, 142.20 (t, J＝12.0 Hz), 140.37, 140.03, 136.23, 130.34, 128.83, 128.28, 127.80, 127.57, 127.09, 126.71, 123.43, 123.41, 120.36, 115.43, 99.99 (dd, J＝20.2, 5.2 Hz). HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₁₆Cl₂F₂NO [M+H]⁺ 442.05715, found 442.05790.

  N-[4-(4-氯-2-甲基苯氧基)-3, 5-二氟苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3x): 286.9 mg白色固体, 收率68%. m.p. 135.1~135.7 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.65~7.52 (m, 4H), 7.44 (dd, J＝7.8, 7.6 Hz, 2H), 7.38~7.29 (m, 1H), 7.23~7.12 (m, 3H), 7.03 (dd, J＝8.5, 2.2 Hz, 1H), 6.68 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 6.57 (d, J＝8.6 Hz, 1H), 5.81 (d, J＝4.3 Hz, 1H), 2.39 (s, 3H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 156.67 (dd, J＝248.4, 7.1 Hz), 155.14, 141.48 (t, J＝11.9 Hz), 140.42, 140.35, 135.92, 130.86, 128.83, 128.64, 128.25, 127.13, 127.04, 126.69, 126.43, 124.37 (t, J＝15.9 Hz), 120.00, 113.97, 100.29 (dd, J＝20.2, 6.2 Hz), 16.01. HRMS (ESI) calcd for C₂₅H₁₉ClF₂NO [M+H]⁺ 422.11177, found 422.11210.

  N-[4-(2-溴-4-氯苯氧基)-3, 5-二氟苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3y): 301.8 mg白色固体, 收率62%. m.p. 132.8~133.8 ℃, ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.60 (d, J＝2.4 Hz, 1H), 7.57 (dd, J＝8.2, 8.0 Hz, 4H), 7.44 (dd, J＝7.8, 7.6 Hz, 2H), 7.33 (dd, J＝7.6, 7.4 Hz, 1H), 7.19 (d, J＝8.5 Hz, 2H), 7.16 (dd, J＝8.8, 2.4 Hz, 1H), 6.68 (dd, J＝8.4, 8.2 Hz, 3H), 5.85 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 156.39 (dd, J＝249.3, 6.8 Hz), 153.63, 142.21 (t, J＝11.6 Hz), 140.36, 140.02, 136.22, 135.21, 133.15, 128.83, 128.27, 128.06, 127.09, 126.70, 123.49, 120.34, 115.14, 111.84, 100.00 (dd, J＝20.5, 5.4 Hz). HRMS (ESI) calcd for C₂₄H₁₆BrClF₂NO [M+H]⁺ 486.00664, found 486.00709.

  N-[3, 5-二氟-4-(萘-2-氧基)苯基]-[1, 1'-联苯]-4-胺(3z): 258.3 mg白色固体, 收率61%. m.p. 129.0~129.8 ℃; ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.81 (dd, J＝8.2, 8.0 Hz, 2H), 7.68 (d, J＝8.2 Hz, 1H), 7.58 (d, J＝8.2 Hz, 4H), 7.48~7.40 (m, 3H), 7.38 (d, J＝7.6 Hz, 1H), 7.36~7.30 (m, 2H), 7.22 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.15 (s, 1H), 6.73 (d, J＝9.6 Hz, 2H), 5.86 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 156.93 (dd, J＝248.8, 7.1 Hz), 156.17, 141.60 (t, J＝12.5 Hz), 140.45, 140.38, 135.93, 134.15, 129.90, 129.80, 128.82, 128.26, 127.73, 127.02, 127.00, 126.70, 126.57, 124.37, 124.15, 120.06, 117.43, 109.20, 100.35 (dd, J＝21.0, 5.6 Hz). HRMS (ESI) calcd for C₂₈H₂₀F₂NO [M+H]⁺ 424.15075 found 424.15110.

  N-{4-[(1-溴萘-2-基)氧基]-3, 5-二氟苯基}-[1, 1'-联苯]-4-胺(3a’): 341.6 mg白色固体, 收率68%. m.p. 168.1~170.0 ℃, ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 8.31 (d, J＝8.6 Hz, 1H), 7.79 (d, J＝8.1 Hz, 1H), 7.73 (d, J＝9.0 Hz, 1H), 7.62 (d, J＝7.6 Hz, 1H), 7.58 (d, J＝7.1 Hz, 4H), 7.50~7.40 (m, 3H), 7.33 (dd, J＝7.4, 7.2 Hz, 1H), 7.20 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.03 (d, J＝8.9 Hz, 1H), 6.70 (d, J＝9.6 Hz, 2H), 5.85 (s, 1H); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 156.65 (dd, J＝249.1, 6.6 Hz), 152.48, 141.79 (t, J＝11.9 Hz), 140.41, 140.24, 136.03, 133.12, 130.74, 128.86, 128.82, 128.26, 128.10, 127.97, 127.04, 126.70, 126.50, 125.10, 124.33 (t, J＝15.7 Hz), 120.13, 114.87, 108.85, 100.20 (dd, J＝18.8, 6.3 Hz). HRMS (ESI) calcd for C₂₈H₁₉BrF₂NO [M+H]⁺ 502.06126, found 502.06200.

  3.4   活性测试方法

  SCR的活性测定方法^[5]为:从-20 ℃的冰箱里取出冻存的氢醌和细胞色素c, 在室温条件下解冻.从-80 ℃的冰箱里取出冻存的酶, 加入已在冰里冷却的Na₂HPO₄-NaH₂PO₄缓冲溶液, 稀释至18 nmol/L, 继续在冰浴条件下冷却.洗好3 mL的石英比色皿, 然后向总体积为1.8 mL的测活体系中依次加入900 μL 0.2 mol/L的Na₂HPO₄-NaH₂PO₄缓冲液(pH＝6.5), 至终浓度为100 mmol/L; 加入120 μL 30 mmol/L的EDTA溶液, 至终浓度为2 mmol/L; 加入180 μL 1 mmol/L的细胞色素c溶液, 至终浓度为100 μmol/L; 加入9 μL 12 mmol/ L的氢醌溶液, 至终浓度为60 μmol/L; 加入13.5 μL 0.1 mol/L的去污剂lauryl maltoside (n-dodecyl-β-D-malto- side)溶液, 至终浓度为750 μmol/L; 最后加水至体积为1795 μL.其中, 氢醌是经琥拍酸钠和泛醌的类似物还原制备而成, 并且氢醌容易发生自身氧化.所以在没有加入酶时两个底物就能发生反应, 但是该反应可以被一种膜蛋白去污剂(lauryl maltoside)抑制, 并且在pH＝6.5的Na₂HPO₄-NaH₂PO₄缓冲液中反应最低, 因此能监测到最大的泛醌-细胞色素c氧化还原酶活性.所以在23 ℃恒温水浴、600 r/min的磁力搅拌条件下开始进行监测; 基线走稳定后加入容易发生自身氧化的底物氢醌, 并记录100 s; 此时斜率表示的是非酶反应速率.加入5 μL 18 nmol/L的酶启动反应, 测活体系中酶浓度为0.05 nmol/L, 反应5 min, 在波长为550 nm处监测底物细胞色素c光吸收的增加, 并采集线性范围内的实验点, 控制底物消耗量不超过5%.细胞色素c的摩尔消光系数为18.5 mL•mol^-1•cm^-1.计算在反应时间内细胞色素c的还原产量并拟合线性斜率, 再扣除非酶反应的斜率值得到的数据为反应的初速度.

  用紫外分光光度计测定底物在饱和的浓度下, 不同浓度的抑制剂对酶的反应动力学.参比:空气或者用buffer对照.在1.8 mL体系中加入底物和2 μL DMSO, 加酶启动反应, 测定无抑制剂时酶的活性.样品:改变抑制剂的浓度, 监测抑制剂对酶活性的影响.数据处理:根据朗伯比尔定律, 将吸光度转换为产物浓度, 再对时间线性拟合得到初速度.将样品与对照相比算出抑制率, IC₅₀值根据下面的公式拟合得到:

  $y = \min + \frac{{\max - \min }}{{1 + {{10}^{x - \log {\rm{I}}{{\rm{C}}_{50}}}}}} $

  公式中: y为对应浓度抑制剂下酶的残留活性与未加抑制剂活性的百分比, max、min为S形曲线的上、下两个平台, 相对活性的最大值和最小值, x为对应抑制剂浓度, IC₅₀为残留活性为50%时的抑制剂浓度.

  辅助材料(Supporting Information)目标化合物3a~3a'的¹H NMR、¹³C NMR和HRMS原始图谱.这些材料可以免费从本刊网站(http://sioc-journal.cn/)上下载.

  
  
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  图 1  商品化复合物Ⅱ或复合物Ⅲ类杀菌剂

  Figure 1  Commercialized fungicides of complexes Ⅱ or Ⅲ

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  图 2  目标化合物的设计

  Figure 2  Design of the target compounds

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  图式 1  目标化合物的合成路线

  Scheme 1  Route of the target compounds

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  表 1  反应条件的优化

  Table 1.  Optimization of the reaction conditions

  Entry	[Cu](equiv.)	Base(equiv.)	Solvent	Time/h	Yielda/%
  1	Cu(OAc)2 (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	65
  2	Cu(OAc)2•H2O (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	58
  3	CuCl2 (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	Trace
  4	CuCl2•2H2O (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	Trace
  5	CuBr2 (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	Trace
  6	CuCl (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	Trace
  7	CuBr (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	Trace
  8	CuI (1.00)	K2CO3 (2.00)	DMF	60	Trace
  9	Cu(OAc)2 (1.00)	Cs2CO3 (2.00)	DMF	60	Trace
  10	Cu(OAc)2 (1.00)	Pyridine (2.00)	DMF	60	Trace
  11	Cu(OAc)2 (1.00)	Et3N (2.00)	DMF	48	75
  12	Cu(OAc)2 (1.00)	Et3N (2.00)	DCM	48	84
  13	Cu(OAc)2 (1.00)	Et3N (2.00)	MeCN	48	90
  14	Cu(OAc)2 (0.50)	Et3N (2.00)	MeCN	72	70
  15	Cu(OAc)2 (0.25)	Et3N (2.00)	MeCN	72	65
  16	Cu(OAc)2 (1.00)	Et3N (2.00)	MeCN	72	30
  aIsolated yields.

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  表 2  目标化合物的合成及其生物活性测试^a

  Table 2.  Synthesis of the target compounds and biological activity

  Entry	Compd.	R1	R2	Yield a/%	Ib/%
  1	3a	H	H	90	30.42
  2	3b	4-Br	H	76	36.95
  3	3c	2, 4-Cl2	H	71	36.09
  4	3d	2-Cl-4-CF3	H	86	39.01
  5	3e	2-Br-4-Cl	H	74	32.16
  6	3f	2, 4, 6-Cl3	2-Cl	94	13.72
  7	3g	2, 4-Cl2	2-Cl	69	6.30
  8	3h	2-Me-4-Cl	2-Cl	67	12.71
  9	3i	2-Cl-4-CF3	2-Cl	74	24.47
  10	3j	2-Br-4-Cl	2-Cl	68	6.81
  11	3k	2-Naphthylc	2-Cl	76	5.73
  12	3l	1-Br-2-naphthylc	2-Cl	70	1.91
  13	3m	2, 4-Cl2	2-F	75	37.70
  14	3n	2-Me-4-Cl	2-F	95	37.39
  15	3o	2-Cl-4-CF3	2-F	73	46.44
  16	3p	2, 4, 6-Cl3	2-F	70	16.02
  17	3q	2-Naphthylc	2-F	65	20.59
  18	3r	1-Br-2-naphthylc	2-F	76	7.62
  19	3s	2, 4-Cl2	2, 6-Cl2	50	4.07
  20	3t	2-Br-4-Cl	2, 6-Cl2	54	10.07
  21	3u	2-Naphthylc	2, 6-Cl2	78	26.09
  22	3v	1-Br-2-naphthylc	2, 6-Cl2	71	3.74
  23	3w	2, 4-Cl2	2, 6-F2	81	38.96
  24	3x	4-Cl-2-Me	2, 6-F2	68	37.78
  25	3y	2-Br-4-Cl	2, 6-F2	62	43.25
  26	3z	2-Naphthylc	2, 6-F2	61	43.20
  27	3a'	1-Br-2-naphthylc	2, 6-F2	68	10.23
  28	嘧菌酯d				95.95
  aIsolated yields; binhibition rates at the concentration of 10 µmol/L; cthe whole ring A as this group; das a positive control.

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