3,6-取代-1,2,4-三氮唑[3,4-<i>a</i>]酞嗪衍生物的合成和抗肿瘤活性评价

引用本文: 王超杰, 曹钦坡, 杨慧, 宋攀攀, 薛登启, 崔飞, 顾一飞, 张孝松, 田亚楠, 张秋荣, 刘宏民. 3,6-取代-1,2,4-三氮唑[3,4-a]酞嗪衍生物的合成和抗肿瘤活性评价[J]. 有机化学, 2016, 36(7): 1626-1635. doi: 10.6023/cjoc201602004 shu

Citation: Wang Chaojie, Cao Qinpo, Yang Hui, Song Panpan, Xue Dengqi, Cui Fei, Gu Yifei, Zhang Xiaosong, Tian Yanan, Zhang Qiurong, Liu Hongmin. Synthesis and Antitumor Activity Evaluation of 3,6-Substituted- 1,2,4-triazolo[3,4-a]phthalazine Derivatives[J]. Chinese Journal of Organic Chemistry, 2016, 36(7): 1626-1635. doi: 10.6023/cjoc201602004 shu

3,6-取代-1,2,4-三氮唑[3,4-a]酞嗪衍生物的合成和抗肿瘤活性评价

a.
郑州大学药学院郑州 450001
b.
新药创制与药物安全性评价河南省协同创新中心郑州 450001

通讯作者: E-mail: zqr406@sina.com; E-mail:liuhm@zzu.edu.cn

基金项目:
河南省科技厅基础 No.142300410328

国家自然科学基金 No.81430085

摘要: 为了寻找高效、经济的抗肿瘤药物，以邻苯二甲酸酐为起始原料，经环合、氯代、取代和环合等反应，合成一系列的3，6-取代-1，2，4-三氮唑并[3，4-a]酞嗪衍生物. 化合物的分子结构均经过¹H NMR、¹³C NMR和HRMS确定，再利用四甲基偶氮唑盐（MTT）方法对合成的化合物在人类四种癌细胞MGC-803人胃癌细胞、EC-9706人食管癌细胞、Hela人宫颈癌细胞、MCF-7乳腺癌细胞进行抗肿瘤活性研究，其中化合物5d对EC-9706人食管癌细胞、Hela人宫颈癌细胞的抗肿瘤活性优于或相当于5-F尿嘧啶，其IC₅₀值分别为3.9和4.5 μmol·L^-1，通过初步作用机制研究，发现化合物5d能诱导EC-9706人食管癌细胞的早期凋亡，并将细胞周期阻断在G2/M阶段.

关键词:

English

Synthesis and Antitumor Activity Evaluation of 3,6-Substituted- 1,2,4-triazolo[3,4-a]phthalazine Derivatives

a.
School of Pharmaceutical Sciences, Zhengzhou 450001
b.
Collaborative Innovation Center of New Drug Research and Saftry Evaluation, Zhengzhou 450001

Corresponding author: Zhang Qiurong, zqr406@sina.com; Liu Hongmin, liuhm@zzu.edu.cn

Received Date: 01 February 2016
Revised Date: 03 March 2016
Fund Project:
the Basic Research Project of Henan Province

the National Natural Science Foundation of China

Abstract: With the aim of obtaining potential antitumor candidates with more efficiency and more economic value. A series of 3,6-substituted-1,2,4-triazolo[3,4-a]phthalazine derivatives were synthesized. The target products were obtained via cyclization, chlorination, substitution, cyclization, substituted with phthalic anhydride used as the starting material. The structures of target products are confirmed by ¹H NMR, ^I3C NMR, HRMS. A series of 3,6-substituted-1,2,4-triazolo[3,4-a] phthalazine derivatives was evaluated for anticancer activity on four human cancer cell lines including EC-9706, HeLa and MCF-7 by MTT assay. Among them, compound 5d was more cytotoxic against EC-9706 and HeLa cell lines, with IC₅₀ values ranging from 3.9 to 4.5 μmol·L^-¹, which are superior or comparable to 5-Fuorouracil. Flow cytometry analysis indicated that compound 5d induced the cellular early apoptosis and cell cycle arrest in G2/M phase in EC-9706.

Key words:

图1 PTK787、目标化合物和来曲唑的结构式

Figure 1. Structures of PTK787,target compound and letrozole

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图图式1 3,6-取代-1,2,4三氮唑并[3,4-a]酞嗪衍生物的合成路线

Figure 图式1. Synthesis of 3,6-substituted-1,2,4-triazolo[3,4-a]phthalazine derivatives

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肿瘤尤其是恶性肿瘤严重危害人类的健康,据世界卫生组织(WHO)研究报告表明,预计至2020年,肿瘤发病率将上升50%,新增患者人数由现在的每年1000万增长至1500万,死亡人数由每年600万增长至1000万,成为致使人类死亡的“第二大杀手”. 因此,抗肿瘤药物的研究开发在当今生命科学领域中极富挑战性而且意义重大^[1],在过去的几十年里,酞嗪类化合物因其广泛的生物活性而受到药物化学研究人员的高度关注^{[2, 3]},其中PTK787(图 1),结构为1,4-二取代酞嗪的血管内皮生长因子受体抑制剂,是酞嗪类化合物中抗肿瘤药物的优秀代表之一. 由Novartis和Schering AG公司合作开发,该药物是一种新型的血管内皮生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂,其能够有效地抑制血管内皮生长因子受体,进而抑制肿瘤生长,并且口服生物利用度很好,目前正在进行转移性直肠癌的三期临床试验^[4]. 1,2,4-三氮唑类化合物具有广泛的生物活性^{[5, 6]},如来曲唑(图 1),有高效选择性抑制芳香化酶的活性,阻断雄烯二酮及睾酮向雌激素的转化,从而影响了雌激素的生物合成,降低体内雌激素水平,对乳腺肿瘤和子宫肌瘤有良好治疗效果,它被美国食品药品监管局(FDA)批准作为一线药物治疗妇女绝经后的乳腺癌^[7]. 本文以PTK78结构中酞嗪部分为母核,根据生物活性亚结构拼接原理,设计并合成一系列的3,6-取代-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪衍生物. 此外,我们评估了合成的化合物在体外对人类四种癌细胞的细胞毒性,并选取化合物5d进行细胞毒性机制的初步研究. 目标化合物的结构见图 1. 目标化合物的合成见Scheme 1.

1 结果与讨论

1.1 目标化合物的合成

对于目标化合物的合成,前期我们尝试了以异丙醇、乙醇、二甲苯、N,N-二甲基甲酰胺为溶剂,三乙胺为缚酸剂,发现在80 ℃条件下均不能反应,因此我们认为合适温度可能是反应发生的关键之一,所以以沸点较高的N,N-二甲基甲酰胺为溶剂,以80～180 ℃为区间,进行了一系列的温度试验,发现130 ℃以下基本不反应,在160～180 ℃区间有反应,但是反应量特别小. 结合以上结论,我们认为合适缚酸剂可能是反应顺利发生的另一关键,因此我们分别用四种不同碱性的碱(碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯和氢氧化钠)作反应的缚酸剂,进行了一系列的试验. 最终发现用氢氧化钠进行碱催化,以N,N-二甲基甲酰胺为溶剂,温度为100 ℃,反应可较好较快的进行.

通过文献调研^[8～15],以邻苯二甲酸酐与水合肼为原料,先发生环合反应生成化合物1,再用三氯氧磷作氯代试剂,发生氯代反应得到化合物2,化合物2在乙醇中与水合肼发生单取代生成化合物3. 化合物3分别与三种环合试剂(原甲酸三乙酯、苯甲酰氯、乙酰氯)发生闭环缩合反应生成化合物4a,4b和4c.

1.2 化合物的图谱分析

图2 目标物5b的COSY图谱

Figure 2. COSY spectra of target compound 5b

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图3 目标物5b的HSQC图谱

Figure 3. HSQC spectra of target compound 5b

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我们以目标物5b的氢谱、碳谱、COSY图谱(图 2),HSQC图谱(图 3),HMBC图谱(图 4)数据为例进行解析,δ 9.40处的单峰对应于苯胺活泼氢的吸收峰,δ 9.2处的单峰对应于三氮唑上CH=N氢的吸收峰. δ 8.61处的双重峰,δ 8.51处的四重峰,δ 8.04处的三重峰,δ 7.95处的多重峰对应于酞嗪母核上的四个苯环氢. δ 7.84处的多重峰,δ 7.45处的多重峰对应于苯胺上苯环的四个氢的吸收峰. δ 141.55处的峰对应于三氮唑上C=N碳的信号峰,δ139.91处的峰为三氮唑CH=N碳的信号峰. δ 150.09,133.94,131.05,125.31,123.34五处峰对应于酞嗪母核上五个碳的信号峰. δ 139.17,128.97,127.24,123.55四处峰对应于苯胺上六个碳的信号峰,且峰位有重叠情况. δ 123.86,119.39两处峰对应于苯环与哒嗪稠和边的两个碳信号峰. ESI-HRMS calcd for C₁₅H₁₀ClN₅ [M+H]⁺: 296.0703,found 296.0708. 综上所述,化合物5b的结构是正确的.

图4 目标物5b的HMBC图谱

Figure 4. HMBC spectra of target compound 5b

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1.3 化合物的生物活性分析

表1 化合物5a～5h,6a～6f和7a～7f的抗肿瘤活性^a Table1. Antitumor activity of target compounds 5a～5h,6a～6f and 7a～7f

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Compd.	R¹	R²	IC₅₀/(μmol•L^-1)
Compd.	R¹	R²	MGC-803	EC-9706	Hela	MCF-7
5a	H	4-Fluoroanilino	35.2±0.7	25.2±0.4	56.9±0.9	64.6±1.2
5b	H	4-Chloroanilino	20.8±0.2	17.6±0.3	41.8±0.5	50.6±0.8
5c	H	4-Bromoanilino	44.8±0.7	27.8±0.3	55.1±1.0	55.8±0.8
5d	H	4-Methoxyanilino	14.3±0.2	4.5±0.1	3.9±0.2	11.4±0.4
5e	H	4-Toluidino	17.1±0.5	16.4±0.3	24.3±0.6	19.0±0.5
5f	H	2-Fluoroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
5g	H	2-Chloroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
5h	H	1-Naphthylamino	13.1±0.4	80.7±1.3	24.7±0.2	114.9±1.9
6a	Ph	4-Fluoroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
6b	Ph	4-Chloroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
6c	Ph	4-Bromoanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
6d	Ph	4-Methoxyanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
6e	Ph	2-Fluoroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
6f	Ph	2-Chloroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
6g	Ph	1-Naphthylamino	96.2±1.5	＞128	37.6±0.6	＞128
7a	CH₃	4-Fluoroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
7b	CH₃	4-Chloroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
7c	CH₃	4-Methoxyanilino	87.7±0.8	60.7±0.4	43.0±0.2	115.6±1.6
7d	CH₃	4-Toluidino	＞128	＞128	＞128	＞128
7e	CH₃	2-Fluoroanilino	50.9±0.8	32.0±0.7	60.4±0.9	83.4±1.0
7f	CH₃	2-Chloroanilino	25.0±0.5	21.6±0.4	41.6±0.7	37.0±0.5
7g	CH₃	1-Naphthylamino	83.0±0.9	42.2±0.5	＞128	20.2±0.4
5-Fu			10.0±0.4	4.7±0.5	12.0±0.7	4.6±0.8
^a Antitumor activity was assayed by exposure for 72 h to substances and expressed as concentration required to inhibit tumor cell proliferation by 50% (IC₅₀). Dates are presented as the means±SDs of three independent experiments.

表1 化合物5a～5h,6a～6f和7a～7f的抗肿瘤活性^a
Table1. Antitumor activity of target compounds 5a～5h,6a～6f and 7a～7f

从表 1中可以看出; 化合物5d对于人食管癌和人宫颈癌细胞的抗肿瘤活性优于阳性对照药5-氟尿嘧啶; 当R¹=H时,化合物5d和5e对于四种癌细胞的抗肿瘤活性优于化合物5a、5b和5c,说明苯胺上有给电子取代基时比吸电子取代基更有利于化合物抗肿瘤活性的表达; 化合物5f和5g对四种肿瘤细胞无抗肿瘤活性,说明当R¹=H时,苯胺的2位取代不利于其抗肿瘤活性的表达; 化合物5b的抗肿瘤活性优于化合物5a和5c,说明在氟氯溴同主族元素中氯原子取代更有利于活性的表达; 化合物7c对四种癌细胞的抗肿瘤活性优于化合物7a和7b,再次说明当苯胺上有给电子取代基时比吸电子取代基更有利于化合物抗肿瘤活性的表达; 化合物7e和7f的活性优于化合物7a,7b,7c和7d,说明当R¹=CH₃时,苯胺的2位取代比4位取代更有利于活性的表达; 化合物7f的抗肿瘤活性优于化合物7e,再次说明氯原子取代更有利于活性的表达; 化合物5a,5b,5c和5d的抗肿瘤活性优于化合物6a,6b,6c,6d,说明当R¹是给电子取代基时比吸电子取代基更有利于化合物抗肿瘤活性的表达.

采用MTT比色法考察22个目标化合物对体外培养的四种癌细胞MGC-803人胃癌细胞、EC-9706人食管癌细胞、Hela人宫颈癌细胞、MCF-7乳腺癌细胞生长的抑制作用.

1.4 化合物5d的对人食管癌细胞凋亡的影响

凋亡是大多数抗癌药物杀死肿瘤细胞的主要方式^[16],为了了解化合物5d是否是通过诱导肿瘤细胞发生凋亡起到抗肿瘤作用,采用FITC-PI双染的方法对化合物5d诱导EC-9706细胞凋亡情况进行了定量的检测. 用化合物5d在不同浓度(0,2.0,4.0,8.0 μmol•L^-1)作用12和24 h后,用流式细胞仪检测凋亡情况. 从图 5～6可以看出,不同浓度的化合物5d (0,2.0,4.0,8.0 μmol• L^-1)和EC-9706细胞孵育12 h后,引发细胞早期凋亡的EC-9706细胞百分比分别是9.2%,19.1%,28.0%,49.9%; 和EC-9706细胞孵育24 h后,发生细胞早期凋亡的EC-9706细胞百分比分别是4.6%,25.8%,41.6%,61.1%. 从结果可以看出,随着化合物5d浓度的增加,显著增加了细胞的凋亡.

图6 化合物5d作用24 h对细胞凋亡的影响

Figure 6. Effect of compound 5d on apoptosis in EC-9706 cells incubated for 24 h

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图5 化合物5d作用12 h对细胞凋亡的影响

Figure 5. Effect of compound 5d on apoptosis in EC-9706 cells incubated for 12 h

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1.5 化合物5d对人食管癌细胞周期的影响

图8 化合物5d作用24 h对细胞周期的影响

Figure 8. Effect of compound 5d on cell cycle in EC-9706 cells incubated for 24 h

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抑制癌细胞生长的药物总是会影响细胞周期的分布,特别是会将细胞周期阻滞在G2/M期^[17],因此检测了活性较好的化合物5d对EC-9706细胞周期分布的影响. 测定了不同的浓度(0,2.0,4.0,8.0 μmol•L^-1),药物作用时间12(图 7)和24 h(图 8)对细胞周期的影响. 从图中可以看出,化合物5d对细胞周期的分布存在一定的浓度依赖性,特别是对于G2/M期的影响. 在药物作用12 h后,随着浓度的增加,其G2/M期所占比例也在逐渐增加,其周期所占百分比分别为: 16.03%、21.06%、27.16%和31.21%. 同样在化合物5d作用24 h后G2/M期所占比例分别为25.79%、46.97%、58.66%和65.24%. 从结果可以看出,化合物5d可以显著地将EC-9706细胞周期阻滞在G2/M期,并且具有时间和浓度依赖性.

图7 化合物5d作用12 h对细胞周期的影响

Figure 7. Effect of compound 5d on cell cycle in EC-9706 cells incubated for 12 h

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2 结论

本文设计并制备出了一系列3,6-取代-1,2,4-三氮唑[3,4-a]酞嗪衍生物,共22个化合物,其中13个化合物未见报道,利用核磁共振氢谱、核磁共振碳谱和高分辨质谱等技术证实了目标化合物的结构. 运用MTT比色法测定了目标化合物对人类四种癌细胞MGC-803人胃癌细胞、EC-9706人食管癌细胞、Hela人宫颈癌细胞、MCF-7乳腺癌细胞的抗肿瘤活性,其中化合物5d对EC-9706人食管癌细胞、Hela人宫颈癌细胞的抗肿瘤活性要优于或相当于5-F尿嘧啶,其IC₅₀值分别为3.9和4.5 μmol•L^-1. 通过初步的作用机制研究,发现化合物5d能诱导 EC-9706人食管癌细胞的早期凋亡,并将细胞周期阻断在G2/M阶段.

3 实验部分

3.1 仪器与试剂

¹H NMR、¹³C NMR谱使用瑞典Bruker DPX-400型超导核磁共振仪测定,TMS为内标; 高分辨质谱使用Waters-Micromass公司Q-Tof质谱仪测定. 薄层硅胶: 中国青岛海洋化工集团公司; 乙酰氯: 天津市密欧化学试剂有限公司; 苯甲酰氯: 青岛雅各化学试剂销售有限公司; 冰乙酸: 天津市永大化学试剂有限公司; N,N-二甲基甲酰胺: 广东光华科技股份有限公司; 无水乙醇: 烟台市双双化工有限公司. 本实验分离纯化所用有机溶剂均为工业级,经重新蒸馏后使用,其他试剂均为市售分析纯,必要时做常规处理.

3.2 实验方法

3.2.10 细胞周期实验

取5×10⁵个处于对数期生长的EC-9706细胞,用不同浓度的测试化合物培养12或者24 h. 温育期后,收集,离心. 并用冰冷的乙醇(70%)固定细胞. 用含有RNA酶A,0.1%的Triton X-100的缓冲液处理细胞,然后用PI染色. 样品通过Accuri C6流式细胞仪(Becton,Dickinson)进行分析. 从流式细胞仪得到的数据用的是FlowJo软件(Tree Star,Inc.,Ashland,OR,USA)分析.

辅助材料(Supporting Information) 化合物5a～5h,6a～6g,7a～7g核磁共振氢谱、碳谱. 这些材料可以免费从本刊网站(http://sioc-journal.cn/)上下载.

3.2.9 细胞凋亡实验

取对数生长期的EC-9706细胞,消化,计数,以 5×10⁵个/孔接种于6孔板中,CO₂培养箱培养24 h; 倒掉培养基,PBS 洗3次,加入含被测药物的培养基,浓度分别为0、2、4、8 μmol•L^-1,每孔2.5 mL,每个浓度设3个复孔,继续培养12 h或者24 h; 收集含药物的培养基,并收集细胞至同一EP管中,1000 r/min离心5 min,弃上清液,用bindingbuffe调整细胞浓度为10⁶/mL; 取100 μL 10⁶个/mL浓度的细胞悬液,加入1 μL的AnnexinV-FITC和2 μL的PI,室温避光放置15 min; 避光染色30 min后上机检测细胞周期,每个样本检测10000个细胞.

3.2.7 目标化合物5a～5h,6a～6g和7a～7g的合成

3-苯基-N-(4-甲氧苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪- 6-胺(6d): 白色固体,收率65.8%. m.p. 265～266 ℃; ¹H NMR (400 MHz,CDCl₃) δ: 8.80 (s,1H,ArH),8.42 (d,J=5.9 Hz,2H,ArH),8.37 (t,J=8.1 Hz,1H,ArH),7.98 (dd,J=14.3,7.7 Hz,2H,ArH),7.86 (t,J=7.6 Hz,1H,ArH),7.53 (d,J=6.1 Hz,3H,ArH),7.33 (s,1H,NH),7.24 (t,J=9.4 Hz,2H,ArH),7.16 (m,1H,ArH); ¹³C NMR (101 MHz,CDCl₃) δ: 153.7,148.8,148.1,142.8,133.4,130.7,129.9,128.5,12 8.0,127.1,126.8,124.7,124.5,124.3,122.7,122.1,118.1,115.2. ESI-HRMS calcd for C₂₁H₁₅F- N₅ [M+H]⁺: 356.1311,found 356.1316.

3-甲基-N-(4-甲氧苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪- 6-胺(7c): 制备方法及投料比同上,得紫色固体,收率66.4%. m.p. 269.5～270.1 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ: 9.16 (s,1H,NH),8.60 (d,J=8.0 Hz,1H,ArH),8.43 (d,J=7.6 Hz,1H,ArH),7.98 (t,J=7.4 Hz,1H,ArH),7.89 (t,J=7.4 Hz,1H,ArH),7.77 (d,J=8.5 Hz,2H,ArH),6.98 (d,J=8.5 Hz,2H,ArH),3.78 (s,3H,OCH₃),2.56 (s,3H,CH₃); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 155.7,149.6,146.7,141.6,133.6,133.2,130.7,125.0,124.1,123.4,123.1,118.9,114.2,55.7,9.8. ESI-HRMS calcd for C₁₇H₁₆N₅ O [M+H]⁺: 306.1355,found 306.1354.

3-甲基-N-(4-氟苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(7a): 制备方法及投料比同上,白色固体,收率 61.8%. m.p. 309～310 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ: 9.30 (s,1H,NH),8.59 (d,J=8.1 Hz,1H,ArH),8.43 (d,J=7.7 Hz,1H,ArH),7.99 (t,J=7.5 Hz,1H,ArH),7.89 (m,3H,ArH),7.24 (t,J=8.7 Hz,2H,ArH),2.57 (s,3H,CH₃); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 158.3,149.4,146.8,141.7,136.6,133.7,130.7,125.1,124.2,123.4,123.3,123.1,118. 8,115.6,9.8. ESI-HRMS calcd for C₁₆H₁₃FN₅ [M+H]⁺: 294.1155,found 294.1154.

N-(1-萘基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(5h): 制备方法及投料比同上,灰色固体,收率50.3%. m.p. 96.3～96.9 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ: 9.85 (s,1H,NH),8.98 (s,1H,CH),8.72 (d,J=8.1 Hz,1H,ArH),8.53 (d,J=7.6 Hz,1H,ArH),8.07 (t,J=7.4 Hz,1H,ArH),8.00 (dd,J=13.2,6.1 Hz,3H,ArH),7.91 (dd,J=8.5,7.0 Hz,1H,ArH),7.62 (q,J=7.0 Hz,2H,ArH),7.56 (t,J=7.1 Hz,1H,ArH),7.49 (t,J=7.2 Hz,1H,ArH); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 152.8, 141.6,139.7,135.7,134.6,133.9,131.2,130.4,128.7,127.1,126.7,126.4,125. 4,125.20,124.0,123.9,123.3,119.4. ESI-HRMS calcd for C₂₅H₁₈N₅ [M+H]⁺: 334.1069,found 334.1064.

N-(4-溴苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(5c): 制备方法及投料比同上,黄色固体,收率71.4%. m.p. 322～323 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ: 9.39 (s,1H,NH),9.22 (s,1H,CH),8.59 (d,J=8.1 Hz,1H,ArH),8.50 (dd,J=7.8,1.0 Hz,1H,ArH),8.03 (m,1H,ArH),7.94 (m,1H,ArH),7.76 (d,J=8.9 Hz,2H,ArH),7.56 (d,J=8.9 Hz,2H,ArH); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 150.0,139.6,133.9,131.9,131.0,125.3,123.9,123.8,123.3,119.4,115.2. ESI-HRMS calcd for C₁₅H₁₁BrN₅ [M+H]⁺: 340.0198,found 340.0197.

3-苯基-N-(2-氯苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(6f): 制备方法及投料比同上,得白色固体,收率79.8%. m.p. 274.9～275.5 ℃; ¹H NMR (400 MHz,CDCl₃) δ: 8.80 (d,J=7.9 Hz,1H,ArH),8.53 (dd,J=8.3,1.2 Hz,1H,ArH),8.43 (dd,J=7.7,1.8 Hz,2H,ArH),7.99 (dd,J=16.3,8.1 Hz,2H,ArH),7.89 (dd,J=11.3,4.2 Hz,1H,ArH),7.76 (s,1H,NH),7.54 (m,4H,ArH),7.37 (m,1H,ArH),7.13 (td,J=7.9,1.3 Hz,1H,ArH); ¹³C NMR (101 MHz,CDCl₃) δ: 148.8,147.9,142.8,135.2,133.4,130.8,129.9,129.3,128.5,128.0,127.6,126.8,124.8,124.5,1 24.2,123.8,122.0,121.9,118.3. HR-MS (ESI) calcd for C₂₁H₁₅ClN₅ [M+H]⁺: 372.1016,found 372.1019.

取0.20 g (1 mmol)化合物4a于25 mL单口圆底烧瓶中,加入1.51 mL N,N-二甲基甲酰胺,溶解后,加入0.12 g (3 mmol) NaOH,加入0.13 g (1.2 mmol)的4-氟苯胺,缓慢升温至100 ℃,1 h后TLC (V_石油醚:V_丙酮=5:3) 显示反应完全. 冷却至室温,加入少量水,析出沉淀,抽滤,取少量N,N-二甲基甲酰胺于25 mL单口瓶中,加入滤饼,超声5 min,加入少量水超声5 min后,抽滤,得化合物5a,淡紫色粉末,收率为69.6%.

3-甲基-N-(2-氯苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(7f): 制备方法及投料比同上,白色固体,收率 84.7%. m.p. 241～242 ℃; ¹H NMR (400 MHz,CDCl₃) δ: 8.69 (d,J=7.9 Hz,1H,ArH),8.58 (dd,J=8.3,1.2 Hz,1H,ArH),7.94 (m,2H,ArH),7.83 (m,1H,ArH),7.79 (s,1H,NH),7.49 (dd,J=8.0,1.2 Hz,1H,ArH),7.40 (m,1H,ArH),7.09 (td,J=7.9,1.3 Hz,1H,ArH),2.78 (s,3H,CH₃); ¹³C NMR (101 MHz,CDCl₃) δ: 147.6,147.5,141.8,135.4,133.3,130.6,129.3,127.8,124.7,124.3,123.7,123.1,122.0,120. 7,118.3,9.9. ESI-HRMS calcd for C₁₆H₁₃ClN₅ [M+H]⁺: 310. 0859,fou nd 310.0858.

3-苯基-N-(4-氟苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(6a): 制备方法及投料比同上,棕色固体,收率62.5%. m.p. 304～305 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ: 9.46 (s,1H,NH ),8.61 (d,J=8.1 Hz,1H,ArH),8.55 (d,J=7.8 Hz,1H,ArH),8.31 (d,J=1.8 Hz,1H,ArH),8.29 (d,J=1.4 Hz,1H,ArH),8.05 (t,J=7.4 Hz,1H,ArH),7.97 (dd,J=11. 2,4.1Hz,1H,ArH),7.82～7.75 (m,2H,ArH),7.57～7.50 (m,3H,ArH),7.29 (t,J=8.9 Hz,2H,ArH); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 150.3,147.7,143.0,136.2,134.0,131. 1,130.1,129.0,127.6,127.1,125.1,125.0,124.9,124.1,123.4,118.8,115.7,115.5. ESI-HRMS calcd for C₂₁H₁₅FN₅ [M+H]⁺: 378.1131,found 378.1126.

N-(4-氯苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(5b): 制备方法及投料比同上,黄色固体,收率70.3%. m.p. 319～320 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ: 9.40 (s,1H,NH),9.2 (s,1H,CH),8.61 (d,J=8.2 Hz,1H,ArH),8.51 (dd,J=7.8,0.9 Hz,1H,ArH),8.04 (t,J=7.2 Hz,1H,ArH),7.95 (m,1H,ArH),7.84 (m,2H,ArH),7.45 (m,2H,ArH); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 150.09,141.55,139.91,139.17,133.94,131.05,128.97,127.24,125.31,12 3.86,123.55,123.34,119.39. ESI-HRMS calcd for C₁₅H₁₁-ClN₅ [M+H]⁺: 296.0703,found 296.0708

N-(2-氯苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(5g): 制备方法及投料比同上,黄色固体,收率78.6%. m.p. 328～329 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ: 9.36 (s,1H,NH),9.14 (s,1H,CH),8.55 (d,J=8.1 Hz,1H,ArH),8.51 (m,1H,ArH),8.04 (dd,J=11.2,4.0 Hz,1H,ArH),7.97 (m,1H,ArH),7.61(d,J=1.5 Hz,1H,ArH),7.59 (d,J=1.5 Hz,1H,ArH),7.45 (td,J=7.6,1.4 Hz,1H,ArH),7.34 (td,J=7.7,1.6 Hz,1H,ArH); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 151.4,141.6,139.8,136.8,134.1,131.2,131.1,130.4,129.5,128.4,128.0,125.3,123.8,123.3,119.1. ESI-HRMS calcd for C₁₅H₁₁ClN₅ [M+H]⁺: 296.0703,found 296.0706.

3-甲基-N-(1-萘基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(7g): 制备方法及投料比同上,得粉红色固体,收率84.7%. m.p. 294.6～295.6 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ: 9.54 (s,1H,NH),8.71 (d,J=8.1 Hz,1H,ArH),8.49 (d,J=7.1 Hz,1H,ArH),7.99 (ddt,J=15.4,8.3,4.3 Hz,4H,ArH),7.88 (d,J=8.2 Hz,1H,ArH),7.72 (d,J=6.7 Hz,1H,ArH),7.54 (m,3H,ArH),2.18 (s,3H,CH₃); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 151.5,146.5,141.8,135.7,134.4,133.8,130.9,129.8,128.6,126.5,126.4,126.2,125.4,124. 2,124.1,123.1,118.9,9.5. ESI-HRMS calcd for C₂₀H₁₆N₅ [M+H]⁺: 326.1406,found 326.1 401.

N-(2-氟苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(5f): 制备方法及投料比同上,黄色固体,收率72.1%. m.p. 318～319 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ: 9.31 (s,1H,NH),9.15 (s,1H,CH),8.54 (d,J=8.1 Hz,1H,ArH),8.51 (d,J=7.8 Hz,1H,ArH),8.04 (t,J=7.4 Hz,1H,ArH),7.96 (dd,J=11.3,4.1 Hz,1H,ArH),7.58 (td,J=7.9,1.5 Hz,1H,ArH),7.32 (m,3H,ArH); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 157.1,151.2,141.7,139.8,134.0,131.2,128. 3,127.5,127.2,125.4,125.2,123.7,123.3,119.1,116.6. ESI-HRMS calcd for C₁₅H₁₁FN₅ [M+H]⁺: 280.0998,found 280.1002.

N-(4-氟苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(5a): m.p. 303.5～304.2 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ: 9.33 (s,1H,NH),9.19 (s,1H,CH),8.60 (d,J=8.1 Hz,1H,ArH),8.50 (dd,J=7.8,0.9 Hz,1H,ArH),8.03 (t,J=7.3 Hz,1H,ArH),7.95 (m,1H,ArH),7.79 (m,2H,ArH),7.25 (m,2H,ArH); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 158.7,150.4,141.5,139.8,136.3,133.8,131.0,125.2,124.4,124.3,123.7,123.3,119.3,115. 8,115.6. ESI-HRMS calcd for C₁₅H₁₁FN₅ [M+H]⁺: 280.0998,found 280.0996.

3-苯基-N-(4-溴苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(6c): 制备方法及投料比同上,白色固体,收率70.3%. m.p. 278～279 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO- d₆) δ: 9.53 (s,1H,NH),8.62 (d,J=8.2 Hz,1H,ArH),8.57 (d,J=7.8 Hz,1H,ArH),8.31 (d,J=1.7 Hz,1H,ArH),8.29 (d,J=1.3 Hz,1H,ArH),8.06 (t,J=7.5 Hz,1H,ArH),7.98 (t,J=7.2 Hz,1H,ArH),7.78 (d,J=8.8 Hz,2H,ArH),7.58 (m,5H,ArH); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 149.9,147.9,14 3.0,139.4,134.0,131.8,131.1,130.2,129.1,127.7,127.1,125.2,124.4,124 .2,123.4,118.8,115.5. ESI-HRMS calcd for C₂₁H₁₅BrN₅ [M+H]⁺: 416.0511,found 416.0513.

3-苯基-N-(4-氯苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(6b): 制备方法及投料比同上,白色固体,收率78.7%. m.p. 317～318 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ: 9.49 (s,1H,NH),8.59 (s,1H,ArH),8.54 (d,J=6.0 Hz,1H,ArH),8.28 (s,2H,ArH),8.03 (s,1H,ArH),7.95 (s,1H,ArH),7.81 (d,J=6.2 Hz,2H,ArH),7.54 (s,3H,ArH),7.47 (d,J=5.9 Hz,2H,ArH); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 149.9,147.8,143.0,139.0,134.0,131.1,130.2,129.1,12 8.8,127.7,127.5,127.1,125.2,124.2,124.1,123.4,118.8. ESI-HRMS calcd for C₂₁H₁₅Cl- N₅ [M+H]⁺: 372.1016,found 372.1013.

3-苯基-N-(2-氟苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(6e): 制备方法及投料比同上,白色固体,收率79.8%. m.p. 275～276 ℃; ¹H NMR (400 MHz,CDCl₃) δ: 8.80 (d,J=7.9 Hz,1H,ArH),8.53 (dd,J=8.3,1.2 Hz,1H,ArH),8.43 (dd,J=7.7,1.8 Hz,2H,ArH),7.99 (dd,J=16.3,8.1 Hz,2H,ArH),7.89 (dd,J=11.3,4.2 Hz,1H,ArH),7.76 (s,1H,NH),7.54 (m,4H,ArH),7.37 (m,1H,ArH),7.13 (td,J=7.9,1.3 Hz,1H,ArH); ¹³C NMR (101 MHz,CDCl₃) δ: 148.8,147.9,142.8,135.2,133.4,130.8,129.9,129.3,12 8.5,128.0,127.6,126.8,124.8,124.5,124.2,123.8,122.0,121.9,118.3. ESI-HRMS calcd for C₂₁H₁₅ClN₅ [M+H]⁺: 372.10 16,found 372.1019.

N-(4-甲基苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺 (5e): 制备方法及投料比同上棕色固体,收率65.6%. m.p. 250～251 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ: 9.35 (s,1H,NH),9.34 (s,1H,CH),8.68 (d,J=8.1 Hz,1H,ArH),8.53 (d,J=7.6 Hz,1H,ArH),8.05 (t,J=7.4 Hz,1H,ArH),7.98 (t,J=7.5 Hz,1H,ArH),7.66 (d,J=8.3 Hz,2H,ArH),7.22 (d,J=8.2 Hz,2H,ArH),2.32 (s,3H,CH₃); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 150.9,141.3,139.7,137.2,133.9,133.2,131.7,129.6,125.39,123.7,122.9,122.7,119.8,21.0. ESI-HRMS calcd for C₁₆ H₁₄N₅ [M+H]⁺: 298.1069,found 298.1064.

3-甲基-N-(2-氟苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(7e): 制备方法及投料比同上,白色固体,收率76.5%. m.p. 239～240 ℃; ¹H NMR (400 MHz,CDCl₃) δ: 8.68 (d,J=7.9 Hz,1H,ArH),8.45 (td,J=8.3,1.4 Hz,1H,ArH),7.93 (dd,J=13.8,7.7 Hz,2H,ArH),7.83 (dd,J=11.2,4.2 Hz,1H,ArH),7.39 (d,J=3.7 Hz,1H,NH),7.23 (m,2H,ArH),7.11 (ddd,J=8.1,5.3,1.5 Hz,1H,ArH),2.77 (s,3H,CH₃); ¹³C NMR (101 MHz,CDCl₃) δ: 153.2,147.7,141.9,133.2,130.5,127.4,124.6,124.2,123.6,122.1,12 1.5,118.2,115.0,9.9. ESI-HRMS calcd for C₁₆H₁₃FN₅ [M+H]⁺: 294.1155,found 294.1154.

3-甲基-N-(4-氯苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(7b): 制备方法及投料比同上,白色固体,收率 72.8%. m.p. 329～330 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ: 9.38 (s,1H,NH),8.59 (d,J=8.0 Hz,1H,ArH),8.44 (d,J=7.6 Hz,1H,ArH),8.00 (t,J=7.4 Hz,1H,ArH),7.91 (d,J=8.1 Hz,3H,ArH),7.45 (d,J=8.4 Hz,2H,ArH),2.59 (s,3H,CH₃); ¹³C NMR (101MHz,DMSO-d₆) δ: 149.2,146.9,141.7,139.3,133.8,130.8,128.9,126.8,125.2,124.2,123.1,122.9,118.8,9.8. ESI- HRMS calcd for C₁₆H₁₃ClN₅ [M+H]⁺: 310.0859,found 310.0857.

3-甲基-N-(4-甲基苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪- 6-胺(7d): 制备方法及投料比同上,棕色固体,收率 72.8%. m.p. 244～245 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO- d₆) δ: 9.19 (s,1H,NH),8.61 (d,J=8.2 Hz,1H,ArH),8.43 (d,J=7.3 Hz,1H,ArH),7.98 (t,J=7.5 Hz,1H,ArH),7.90 (dd,J=11.3,4.1 Hz,1H,ArH),7.75 (d,J=8.4 Hz,2H,ArH),7.20 (d,J=8.3 Hz,2H,ArH),2.57 (s,3H,CH₃),2.31 (s,3H,CH₃); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 149.4,146.8,141. 6,137.7,133.6,132.3,130.7,129.4,125.1,124.1,123.1,121.6,118.9,20.9,9.8. ESI-HRMS calcd for C₁₇H₁₆N₅ [M+H]⁺: 290.1406,found 290.1401.

3-苯基-N-(1-萘基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(6g): 制备方法及投料比同上,得粉红色固体,收率79.8%. m.p. 276.2～276.8 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ: 9.85 (s,1H,NH),8.77 (d,J=8.0 Hz,1H,ArH),8.58 (d,J=7.6 Hz,1H,ArH),8.06 (dt,J=13.4,7.6 Hz,4H,ArH),7.96 (d,J=6.8 Hz,1H,ArH),7.63 (m,5H,ArH),7.50 (t,J=7.5 Hz,1H,ArH),7.26 (t,J=7.3 Hz,1H,ArH),7.03 (t,J=7.6 Hz,2H,ArH); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 152.2,147.1,136.1,134.5,134.0,131.3,130.0,129.7,128. 7,128.5,127.0,126.9 ,126.8,126.5,126.3,125.3,124.6,124.3,124.2,123.4,118.6. ESI-HRMS calcd for C₂₅H₁₈N₅ [M+H]⁺: 388.1562,found 388.1567.

N-(4-甲氧基苯基)-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪-6-胺(5d): 制备方法及投料比同上,棕色固体,收率68.5%. m.p. 269～270 ℃; ¹H NMR (400 MHz,DMSO-d₆) δ: 9.17 (s,1H,NH),9.14 (s,1H,CH),8.59 (d,J=8.2 Hz,1H,ArH),8.49 (m,1H,ArH),8.01 (t,J=7.2 Hz,1H,ArH),7.93 (m,1H,ArH),7.65 (d,J=9.0 Hz,2H,ArH),7.00 (d,J=9.0 Hz,2H,ArH),3.78 (s,3H,OCH₃); ¹³C NMR (101 MHz,DMSO-d₆) δ: 156.2,150.8,133.7,132.8,131.1,125.1,124.6,123.7,123.3,119.4,114.3,55.7. ESI-HRMS calcd for C₁₆H₁₄N₅O [M+H]⁺: 314.1018,found 314.1012.

3.2.8 抗肿瘤细胞毒活性实验

初步筛选: 取对数生长期的细胞,消化、计数,以6000个/孔的细胞密度接种至96孔板中,每孔150 μL,培养24 h后,吸去培养基,加配好浓度药液(浓度梯度为25、50和100 μg/mL),每个浓度设6个复孔另设空白对照组及阴性对照组. 药物作用72 h后,每孔加入20 μL MTT,继续培养4 h后,吸去液体,加入150 μL的二甲基亚砜,振荡均匀,酶标仪490 nm处检测吸光度值,计算抑制率. 进一步筛选: 样品抑制率大于50%的样品进行半数抑制率(IC₅₀)实验. 即将待测样品以1、2、4、8、16、32、64 μg/mL浓度加入96孔板中,实验方法同上,培养72 h后,测490 nm时的吸光度值,通过SPSS16.0统计软件计算得出IC₅₀值.

3.2.1 2,3-二氢酞嗪-1,4-二酮(1)的合成

取邻苯二甲酸酐6.0 g (40 mmol)于100 mL单口圆底烧瓶中,加入22 mL冰醋酸搅拌,加热到120 ℃,缓慢滴加水合肼2.8 mL (44 mmol),反应约4 h. 将反应液冷至室温,抽滤,用石油醚洗涤两次,真空干燥,得白色产物5.9 g,收率91.0%. m.p. 180～181 ℃(文献值^[18]: 181～182 ℃).

3.2.5 3-苯基-6-氯-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪(4b)的合成

将化合物3 (1.94 g,10 mmol)溶解于二氧六环(200 mL)中,在搅拌的条件下,加三乙胺(1.68 mL,12 mmol)然后缓慢滴加苯甲酰氯(0.85 mL,12 mmol). 将混合物加热至110 ℃,约20 h反应完成(通过TLC监测),将溶剂减压除去,得到的固体在二氯甲烷(150 mL)和水(100 mL×3)分配. 将有机层用无水硫酸镁干燥,过滤,并减压浓缩,得到固体通过硅胶柱色谱纯化,用[V(石油醚):V(乙酸乙酯)=1:2]作为洗脱液,得到黄色固体4b (1.65 g,76%). m.p. 172～173 ℃(文献值^[18]: 173～174 ℃).

3.2.6 3-甲基-6-氯-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪(4c)的合成

用乙酰氯替代苯甲酰氯,制备方法见化合物4b的制备,收率为78%. m.p. 169～170 ℃(文献值^[18]: 170～171 ℃).

3.2.2 1,4-二氯酞嗪(2)的合成

取1.68 g (10 mmol)上述2,3-二氯酞嗪-1,4-二酮(1)于50 mL单口圆底烧瓶中,加入15 mL三氯氧磷并搅拌,温度至80 ℃时原料完全溶解,再缓慢升温至110 ℃,反应约1 h后TLC (V_石油醚:V_乙酸乙酯=3:1)显示反应完全. 将反应液冷却至室温,逐滴加入到碎冰中,边滴加边搅拌,析出乳白色固体,抽滤,超纯水洗涤至中性,真空干燥,得产物1.85 g,收率90.2%. m.p. 192～194 ℃(文献值^[18]: 192～193 ℃).

3.2.4 6-氯-1,2,4-三氮唑并[3,4-a]酞嗪(4a)的合成

取1.49 g (7.73 mmol) 1-氯-4-肼基酞嗪(3)于50 mL单口圆底烧瓶中,加入25 mL二氧六环,1.44 mL (9.28 mmol)原甲酸三乙酯,1.08 mL (7.73 mmol)三乙胺,然后缓慢升温至100 ℃,反应约6 h后TLC [V(石油醚):V(乙酸乙酯)=1:2]显示反应完全,冷至室温,将溶剂减压除去,得到的固体在二氯甲烷(150 mL)和水(100 mL×3)中分配.将有机层用无水硫酸镁干燥,过滤,减压浓缩,得到固体通过硅胶柱色谱纯化,用[V(石油醚):V(乙酸乙酯)=1:2]作为洗脱液,得到黄色固体1.29 g,收率82%. m.p. 176～178 ℃(文献值^[18]: 176～177 ℃).

3.2.3 1-氯-4-肼酞嗪(3)的合成

取50 mL无水乙醇于100 mL单口圆底烧瓶中,加入3.73 mL (76.51 mmol)水合肼,升温至78 ℃,加入1.98 g (10 mmol) 1,4-二氯酞嗪(2),反应0.5 h后,TLC (V_石油醚:V_乙酸乙酯=3:1)显示反应完全. 冷却至室温,抽滤,然后将固体加入20 mL无水乙醚中超声10 min,抽滤,真空干燥,得黄色产物1.49 g,收率77%. m.p. 258～26 0 ℃(文献值^[18]: 259～260 ℃).

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图 1 PTK787、目标化合物和来曲唑的结构式

Figure 1 Structures of PTK787,target compound and letrozole

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图式1 3,6-取代-1,2,4三氮唑并[3,4-a]酞嗪衍生物的合成路线

Scheme 1 Synthesis of 3,6-substituted-1,2,4-triazolo[3,4-a]phthalazine derivatives

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图 2 目标物5b的COSY图谱

Figure 2 COSY spectra of target compound 5b

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图 3 目标物5b的HSQC图谱

Figure 3 HSQC spectra of target compound 5b

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图 4 目标物5b的HMBC图谱

Figure 4 HMBC spectra of target compound 5b

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图 5 化合物5d作用12 h对细胞凋亡的影响

Figure 5 Effect of compound 5d on apoptosis in EC-9706 cells incubated for 12 h

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图 6 化合物5d作用24 h对细胞凋亡的影响

Figure 6 Effect of compound 5d on apoptosis in EC-9706 cells incubated for 24 h

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图 7 化合物5d作用12 h对细胞周期的影响

Figure 7 Effect of compound 5d on cell cycle in EC-9706 cells incubated for 12 h

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图 8 化合物5d作用24 h对细胞周期的影响

Figure 8 Effect of compound 5d on cell cycle in EC-9706 cells incubated for 24 h

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表 1 化合物5a～5h,6a～6f和7a～7f的抗肿瘤活性^a

Table 1. Antitumor activity of target compounds 5a～5h,6a～6f and 7a～7f

Compd.	R¹	R²	IC₅₀/(μmol•L^-1)
Compd.	R¹	R²	MGC-803	EC-9706	Hela	MCF-7
5a	H	4-Fluoroanilino	35.2±0.7	25.2±0.4	56.9±0.9	64.6±1.2
5b	H	4-Chloroanilino	20.8±0.2	17.6±0.3	41.8±0.5	50.6±0.8
5c	H	4-Bromoanilino	44.8±0.7	27.8±0.3	55.1±1.0	55.8±0.8
5d	H	4-Methoxyanilino	14.3±0.2	4.5±0.1	3.9±0.2	11.4±0.4
5e	H	4-Toluidino	17.1±0.5	16.4±0.3	24.3±0.6	19.0±0.5
5f	H	2-Fluoroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
5g	H	2-Chloroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
5h	H	1-Naphthylamino	13.1±0.4	80.7±1.3	24.7±0.2	114.9±1.9
6a	Ph	4-Fluoroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
6b	Ph	4-Chloroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
6c	Ph	4-Bromoanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
6d	Ph	4-Methoxyanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
6e	Ph	2-Fluoroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
6f	Ph	2-Chloroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
6g	Ph	1-Naphthylamino	96.2±1.5	＞128	37.6±0.6	＞128
7a	CH₃	4-Fluoroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
7b	CH₃	4-Chloroanilino	＞128	＞128	＞128	＞128
7c	CH₃	4-Methoxyanilino	87.7±0.8	60.7±0.4	43.0±0.2	115.6±1.6
7d	CH₃	4-Toluidino	＞128	＞128	＞128	＞128
7e	CH₃	2-Fluoroanilino	50.9±0.8	32.0±0.7	60.4±0.9	83.4±1.0
7f	CH₃	2-Chloroanilino	25.0±0.5	21.6±0.4	41.6±0.7	37.0±0.5
7g	CH₃	1-Naphthylamino	83.0±0.9	42.2±0.5	＞128	20.2±0.4
5-Fu			10.0±0.4	4.7±0.5	12.0±0.7	4.6±0.8
^a Antitumor activity was assayed by exposure for 72 h to substances and expressed as concentration required to inhibit tumor cell proliferation by 50% (IC₅₀). Dates are presented as the means±SDs of three independent experiments.

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通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com

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沈阳化工大学材料科学与工程学院沈阳 110142