新型酰基硫脲衍生物的合成及细胞分裂周期25B磷酸酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制活性研究

引用本文: 李英俊, 王思远, 靳焜, 高立信, 盛丽, 张楠, 杨凯栋, 赵月, 李佳. 新型酰基硫脲衍生物的合成及细胞分裂周期25B磷酸酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制活性研究[J]. 有机化学, 2018, 38(5): 1242-1250. doi: 10.6023/cjoc201709022 shu

Citation: Li Yingjun, Wang Siyuan, Jin Kun, Gao Lixin, Sheng Li, Zhang Nan, Yang Kaidong, Zhao Yue, Li Jian. Synthesis and Cell Division Cycle 25B Phosphatase/Protein Tyrosine Phosphatase 1B Inhibitory Activity Evaluation of Novel Acylthiourea Derivatives[J]. Chinese Journal of Organic Chemistry, 2018, 38(5): 1242-1250. doi: 10.6023/cjoc201709022 shu

新型酰基硫脲衍生物的合成及细胞分裂周期25B磷酸酶和蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制活性研究

李英俊 ^{a,
,} ,
王思远 ^a, ,
靳焜 ^b, ,
高立信 ^c, ,
盛丽 ^c, ,
张楠 ^a, ,
杨凯栋 ^a, ,
赵月 ^a, ,
李佳 ^{c,
,}

a.
辽宁师范大学化学化工学院大连 116029
b.
大连理工大学精细化工国家重点实验室大连 116012
c.
中国科学院上海药物研究所国家新药筛选中心药物研究国家重点实验室上海 201203

通讯作者: 李英俊, chemlab.lnnu@163.com; 李佳,

基金项目:

辽宁省自然科学基金（No.20102126）资助项目

摘要: 采用超声波辐射与固-液相转移催化联用技术合成出了一系列新型含咔唑基团的酰基硫脲衍生物3，利用IR、¹H NMR、¹³C NMR和元素分析对其进行了结构表征.该合成方法具有反应时间短、操作简便、产率高等优点.对所合成的目标化合物进行了细胞分裂周期25B磷酸酶（Cdc25B）和蛋白酪氨酸磷酸酶1B（PTP1B）抑制活性筛选，实验结果显示，目标化合物3对Cdc25B均具有良好的抑制活性，部分化合物对PTP1B也表现出良好的抑制活性.其中1-（4-硝基苯甲酰基）-3-（9-乙基-咔唑-3-基）硫脲（3n）对Cdc25B的抑制活性最高[IC₅₀=（0.49±0.12）mg/mL]，1-（2-硝基苯甲酰基）-3-（9-乙基-咔唑-3-基）硫脲（3l）对PTP1B的抑制活性最高[IC₅₀=（3.59±1.15）mg/mL].值得注意的是，化合物3n对Cdc25B和PTP1B均具有较高的抑制活性.分子对接的初步研究结果揭示了此类抑制剂的结构-活性关系.这些活性目标化合物是潜在的Cdc25B和PTP1B抑制剂，在癌症和糖尿病治疗方面具有很好的应用前景.

关键词:

English

Synthesis and Cell Division Cycle 25B Phosphatase/Protein Tyrosine Phosphatase 1B Inhibitory Activity Evaluation of Novel Acylthiourea Derivatives

Li Yingjun ^{a,
,} ,
Wang Siyuan ^a, ,
Jin Kun ^b, ,
Gao Lixin ^c, ,
Sheng Li ^c, ,
Zhang Nan ^a, ,
Yang Kaidong ^a, ,
Zhao Yue ^a, ,
Li Jian ^{c,
,}

a.
College of Chemistry and Chemical Engineering, Liaoning Normal University, Dalian 116029
b.
State Key Laboratory of Fine Chemicals, Dalian University of Technology, Dalian 116012
c.
State Key Laboratory of Drug Research, National Center for Drug Screening, Shanghai Institute of Materia Medica, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 201203

Corresponding author: Li Yingjun, E-mail:chemlab.lnnu@163.com; Li Jian

Received Date: 13 September 2017
Revised Date: 04 December 2017
Available Online: 01 May 2018
Fund Project:

Project supported by the Natural Science Foundation of Liaoning Province (No. 20102126)

Abstract: A series of new acylthiourea derivatives 3 containing carbazole moity have been synthesized by the techniques of ultrasonic irradiation and solid-liquid phase transfer catalysis. Their structures were characterized by IR, ¹H NMR, ¹³C NMR spectra and elemental analysis. This synthetic method has the advantages of short reaction time, simple operation and high yield. All synthesized target compounds were screened for their inhibitory activity against cell division cycle 25B phosphatase (Cdc25B) and protein tyrosine phosphatase 1B (PTP1B). The results show that all the compounds 3 display significant inhibitory activities against Cdc25B, and partial target compounds 3 also show significant inhibitory activities against PTP1B. Among them, 1-(4-nitrobenzoyl)-3-(9-ethyl-carbazole-3-yl)thiourea (3n) exhibits highest inhibitory activity against Cdc25B [IC₅₀=(0.49±0.12) mg/mL] and 1-(2-nitrobenzoyl)-3-(9-ethyl-carbazole-3-yl)thiourea (3l) displays highest inhibitory activity against PTP1B [IC₅₀=(3.59±1.15) mg/mL]. It is noteworthy that compound 3n shows higher inhibitory activity against Cdc25B and PTP1B. The preliminary research results of molecular docking revealed the structural-activity of the inhibitors. The active compounds can be considered as potential Cdc25B and PTP1B inhibitors, and have great application prospects in the treatment of cancers and diabetes.

Key words:

酰基硫脲(Acylthioureas, ATUs)是一类非常重要的化合物, 具有广谱生物活性, 如抗癌^[1~5]、抗菌^[6~11]、抗病毒^{[12, 13]}、抗结核^[14]、抑制阿尔茨海默氏症^[15]、杀线虫^{[16, 17]}、植物生长调节^[18]等活性, 因此, 酰基硫脲已成为引人注目的未来药物设计的模板^[19].由于酰基硫脲类化合物容易合成并且其在医药方面具有巨大的应用, 因而引起了人们越来越多的关注.大量的文献报道显示, 咔唑(Cz)及其衍生物具有广谱的生物活性, 如抗癌^{[20, 21]}、抗糖尿病^{[22, 23]}、抗菌^[24]、抗氧化^[25~27]、抗结核^[28]、保肝和抑制蛋白酪氨酸磷酸酯酶1B (PTP1B)^[29]、抑制微管蛋白聚合^[30]、抑制Pim激酶^{[31, 32]}、抑制拓扑异构酶^[33]以及神经保护^{[34, 35]}等作用, 可见咔唑衍生物在抗癌、保肝、抗糖尿病、治疗帕金森和阿尔茨海默氏症等方面具有潜在的应用价值.

癌症是世界上发病和死亡的主要原因之一.大量研究证实, 在多种人类癌症中细胞分裂周期25B磷酸酶(Cdc25B)是过度表达的, 因此, Cdc25B是治疗癌症的一个重要靶标^{[36, 37]}.糖尿病(DM)是由于胰岛素分泌不足导致高血糖症的常见慢性代谢疾病^[23].大量研究证明, 在胰岛素抵抗状态下PTP1B的过表达可以抑制胰岛素表达的增加.因此, PTP1B已被确认是治疗2型糖尿病(T2D)及其并发症的一个重要靶标^{[38, 39]}.近年来设计、合成并开发小分子Cdc25B和PTP1B抑制剂已经引起了人们的关注.

鉴于上述事实, 为了继续我们的研究工作, 即寻找在抗癌和抗糖尿病方面具有潜在应用价值的、高选择性和高活性的新型Cdc25B和PTP1B抑制剂^{[37, 40~42]}, 本文设计将咔唑和芳酰基基团分别引入到硫脲结构的1-和3-位, 采用超声波辐射与固-液相转移催化联用技术, 合成出一系列新型的含咔唑基团的芳酰基硫脲衍生物, 并评价它们抑制Cdc25B和PTP1B的活性、研究结构-活性关系.利用超声波辐射与固-液相转移催化联用技术合成分子中含有咔唑基团的芳酰基硫脲化合物目前尚未见文献报道.目标化合物的合成路线见Scheme 1.

图式 1

图式 1. 化合物3a~3n的合成路线

Scheme 1. Synthetic route of target compounds 3a~3n

R = H (3a), 3-CH₃ (3b), 4-CH₃ (3c), 3-CH₃O (3d), 4-CH₃O (3e), 2-Cl (3f), 3-Cl (3g), 4-Cl (3h), 2-F (3i), 3-F (3j), 4-F (3k), 2-NO₂ (3l), 3-NO₂ (3m), 4-NO₂ (3n)

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1. 结果与讨论

1.1 目标化合物的合成

酰基硫脲类化合物因其在药物化学领域的巨大应用已引起了人们对其合成的关注.文献已报道的合成方法常用的有经典的加热搅拌回流法^{[5, 16]}、液-液^[8]和固-液相转移催化法^[43]等.

考虑到在液-液相转移催化合成法中, 水的存在下, 可能发生酰氯的水解, 导致酰基异硫氰酸酯的产率降低, 所以本文采用以聚乙二醇-400(PEG-400)为相转移催化剂, CH₂Cl₂为溶剂, 在15~30 ℃, 超声波辐射下, 由芳甲酰氯1与硫氰酸铵反应制得了芳酰基异硫氰酸酯2, 化合物2不经分离直接与3-氨基-9-乙基咔唑(AECz)反应合成出了目标化合物3.为了考察超声波辐射对该反应的必要性, 我们采用搅拌法代替超声波辐射, 而其它条件不变的情况下, 合成了化合物3a, 3d和3n, 所得产率分别为64.9%, 49.6%和70.8%, 而用本文超声波辐射与固-液相转移催化(SL-PTC)联用技术合成出化合物3a, 3d和3n的产率分别为82.4%, 72.7%和89.3%.这一实验结果说明, 超声波辐射对此反应的必要性.这种超声波辐射与SL-PTC联用合成法具有操作简便、反应温度低、反应时间短、产率较高等优点.文中给出的产率为纯化后所得结果.

酰基异硫氰酸酯2与亲核试剂(AECz)的反应是复杂的, 存在着对N＝C＝S体系中碳原子的亲核加成及对羰基-碳原子的亲核取代反应的相互竞争.由实验结果可知, 在本实验条件下, 对N＝C＝S体系中碳原子的亲核加成反应占优势, 即目标化合物3为主要产物.

1.2 目标化合物3的结构确定

1.2.1 目标化合物3的IR谱

目标化合物的IR数据显示, 化合物3在3152~3424 cm^-1处出现的峰为N—H的伸缩振动吸收峰; 在3043~3069 cm^-1处出现的峰为不饱和C—H的伸缩振动吸收峰; 在2866~2986 cm^-1处出现的峰为饱和C—H的伸缩振动吸收峰; 在1660~1688 cm^-1处出现的中等强度峰为C＝O的伸缩振动吸收峰, 此吸收峰红移是因为形成了N—H_a…O＝C分子内氢键所致(Scheme 2); 在1469~1601 cm^-1处出现的强峰为苯环骨架伸缩振动吸收峰; 在1526~1559 cm^-1处出现的宽的强峰为N—H的弯曲振动吸收峰; 在1330~1347处出现的峰为C—N伸缩振动吸收峰; 在1135~1170 cm^-1处出现的强峰为C＝S伸缩振动吸收峰; 在1525~1537 cm^-1处出现的强峰为NO₂伸缩振动吸收峰; 在1250~1348 cm^-1处出现的强峰为C—O伸缩振动吸收峰. N—H和C＝S伸缩振动吸收峰的出现, 表明目标化合物3已被合成出来.

1.2.2 目标化合物3的NMR谱

目标化合物的¹H NMR数据显示, 在低场δ 12.78~12.32之间出现的单峰为NH_a质子的吸收峰; 在次低场δ 12.16~11.39之间出现的单峰为与羰基相连的NH_b质子吸收峰. NH_a和NH_b两个质子化学位移不同是由于分子内氢键的形成, 导致去屏蔽作用的结果(见图 1).在酰基硫脲化合物的单晶X射线衍射中常常见到这种氢键的六元环^{[44, 45]}.在δ 7.11~8.82处出现的峰为芳环与咔唑环上的质子吸收峰, 在δ 4.47~4.48处出现的峰为CH₂的质子吸收峰, 在δ 1.34处出现的峰为CH₃的质子吸收峰.

图 1

图 1. 目标化合物3的结构

Figure 1. Structures of target compounds 3

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目标化合物的¹³C NMR数据显示, 在δ 179.06~179.74和δ 165.39~168.43处出现的两个单峰分别归属为C＝S和C＝O中碳的信号峰.在δ 108.88~165.91处出现的峰均为芳环上碳的信号峰.对于含氟的化合物3i~3k, 由于存在着¹³C-¹⁹F偶合, 导致谱线裂分.在δ 37.06~37.08和13.69~13.71处出现的两个单峰分别归属为CH₂和CH₃中碳的信号峰.在δ 20.79~21.11和55.43~55.56处出现的两个单峰分别归属为与芳环相连的CH₃和CH₃O中碳的信号峰.由NMR谱可进一步证明, 目标化合物3已被成功合成出来.

1.3 目标化合物3的生物活性研究

对所合成的目标化合物3a~3n进行了Cdc25B和PTP1B抑制活性的筛选.尽管目标化合物3a已在早先被合成出来^[46], 但未进行此方面的活性研究.初次筛选浓度为20 μg/mL.在此条件下表现出活性的样品, 即抑制率＞50%, 再测其活性剂量依赖关系, 即IC₅₀值.测试结果见表 1.

表 1

表 1 目标化合物3对Cdc25B和PTP1B的抑制活性

Table 1. Inhibitory activities of target compounds 3 against Cdc25B and PTP1B

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Compd.	Ar	Cdc25B^a		PTP1B^b
Compd.	Ar	Inhibition/% at 20 μg/mL	IC₅₀^c/(μg•mL^-1)	Inhibition/% at 20 μg/mL	IC₅₀^c/(μg•mL^-1)
3a	C₆H₅	92.15±0.35	2.25±0.21	61.10±0.37	10.39±3.16
3b	3-CH₃C₆H₄	93.29±2.78	1.50±0.58	80.92±4.87	6.04±0.51
3c	4-CH₃C₆H₄	93.91±0.18	1.41±0.22	86.81±1.05	4.25±0.74
3d	3-CH₃OC₆H₄	98.78±0.91	1.24±0.07	90.01±5.15	4.98±0.01
3e	4-CH₃OC₆H₄	94.47±0.18	1.11±0.04	99.00±0.33	4.46±0.99
3f	2-ClC₆H₄	94.95±0.79	2.34±0.13	82.01±6.01	6.12±1.67
3g	3-ClC₆H₄	92.61±0.42	1.16±0.07	37.79±1.88	—
3h	4-ClC₆H₄	97.24±0.96	1.08±0.11	52.14±3.39	9.74 ± 4.50
3i	2-FC₆H₄	87.94±0.58	3.40±0.15	46.10±4.18	—
3j	3-FC₆H₄	94.91±0.22	1.21±0.22	41.85±3.49	—
3k	4-FC₆H₄	91.57±1.41	2.42±0.81	81.80±9.69	5.83±0.81
3l	2-O₂NC₆H₄	93.65±0.84	5.31±0.59	77.00±1.25	3.59±1.15
3m	3-O₂NC₆H₄	94.26±0.82	0.62±0.01	86.35±1.25	5.14±0.92
3n	4-O₂NC₆H₄	99.12±0.81	0.49±0.12	68.14±0.37	4.24±0.49
^a 阳性对照药物: Na₃VO₄, IC₅₀＝0.28 μmol•L^-1. ^b 阳性对照药物:齐墩果酸, IC₅₀＝(1.18±0.17) μg/mL. ^c “-”:没计算, 因抑制率＜50%.

由表 1的实验结果可知:目标化合物3对Cdc25B均具有较高的抑制活性, 抑制率为87.94%~99.12%, 其中化合物3n的抑制活性最高, IC₅₀＝(0.49±0.12) μg/mL.观察结构与活性的关系发现, 化合物3对Cdc-25B的抑制活性与Ar中苯环上取代基的性质及其所处的位置有关.当Ar上引入取代基时, 活性均高于无取代基的化合物3a(除3f, 3i和3l外).当Ar的3-和4-位引入取代基时活性较高; 当Ar的3-和4-位引入强的吸电子取代基时活性最高(3m和3n).当Ar的2-位引入取代基时活性较3a降低(3f, 3i和3l), IC₅₀为2.34~5.31 μg/mL.

由表 1的实验结果还可看出, 部分目标化合物3对PTP1B具有较好的抑制活性, 其中化合物3l对PTP1B的抑制活性最高[IC₅₀＝(3.59±1.15) μg/mL].观察结构与活性关系发现, 化合物3对PTP1B的抑制活性也与Ar上取代基的性质及其所处的位置有关.当Ar上无取代基时活性最低(3a); 当Ar的4-位引入供/强吸电子取代基时活性较高(3c, 3e和3n); 当Ar的2-位引入强吸电子取代基时活性最高(3l).

由文献调查可知, 含有咔唑环的酰基硫脲衍生物对Cdc25B和PTP1B抑制活性的研究目前尚未见文献报道.研究结果表明, 此类化合物是潜在的Cdc25B和PTP1B抑制剂, 在癌症和糖尿病治疗方面具有很好的应用前景.

1.3 分子对接研究

由目标化合物3对Cdc25B和PTP1B抑制活性研究(表 1)发现, 化合物3a~3k对Cdc25B的抑制活性差别不大, 但硝基取代的三个化合物3l、3m和3n的活性差别非常明显.硝基在间位、对位的化合物3m和3n, 活性较邻位化合物3l强10倍左右.相应地, 化合物3i, 3j和3k对PTP1B抑制活性的差异也非常明显, 当氟原子在苯环的2-位和3-位时, 抑制活性基本丧失, 而在4-位时活性较好, 但活性仍低于化合物3l.这促使我们对这些化合物进行分子对接研究, 以便进一步了解它们在Cdc25B/PTP1B蛋白酶中可能的结合位点与结合能力.

化合物3l、3m和3n与Cdc25B的分子对接结果见图 2和表 2; 化合物3i, 3j, 3k和3l与PTP1B的分子对接结果见图 3和表 3.

图 2

图 2. 化合物3l (A)、3m (B)和3n (C)与Cdc25B的分子对接

Figure 2. Molecular docking of compounds 3l (A), 3m (B) and 3n (C) with Cdc25B enzyme

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表 2

表 2 目标化合物3l、3m和3n与Cdc25B的分子对接结果

Table 2. Molecular docking results of compounds 3l, 3mand 3n with Cdc25B (PDB ID:1QB0)

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Compd.	No. of H-bond	H-bond	H-bond length/Å
3l	2	N3-PHE452	2.92
3l	2	N3-SER456	3.01
3m	3	N3-ASN442	3.29
		H6-TYR432	3.36
		H6-ASN442	2.57
3n	5	N2-THR390	2.75
		N1-VAL391	3.46
		N1-LEU398	3.32
		H5-ARG376	3.62
		H5-THR390	2.99

图 3

图 3. 化合物3i (A)、3j (B)、3k (C)和3l (D)与PTP1B的分子对接

Figure 3. Molecular docking of compounds 3i (A), 3j (B), 3k (C) and 3l (D) with PTP1B enzyme

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表 3

表 3 目标化合物3i、3j、3k和3l与PTP1B的分子对接结果

Table 3. Molecular docking results of compounds 3i, 3j, 3kand 3l with PTP1B (PDB ID:1NNY)

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Compd.	No. of H-bond	H-bond	H-bond length/Å
3i	1	N1-GLU132	3.18
3j	0	—	—
3k	2	N2-GLU101	3.20
3k	2	O1-THR164	3.33
3l	3	N3-HIS54	2.71
		N2-HIS54	2.96
		H6-SER55	3.62

由图 2和表 2的分子对接结果可知, 化合物3l、3m和3n与Cdc25B (PDB ID: 1QB0)之间均存在着相互作用, 因而它们均具有抑制Cdc25B的活性.化合物3m和3n处于Cdc25B磷酸酯酶的活性位点区域, 所以它们的活性相近.三者活性的差异主要是由于与Cdc25B酶键合氢键数目的不同所引起的, 化合物3n与酶键合的氢键数目多于化合物3m, 所以化合物3n的活性稍高.而化合物3l与酶则在位点Ⅲ处键合(即螺旋B和几个循环两侧的口袋), 且氢键键合的数目少于化合物3m和3n, 所以三者比较化合物3l的活性最低.

由图 3和表 3的分子对接研究可知, 化合物3k和3l均处于PTP1B (PDB ID:1NNY)的活性位点区域, 所以具有较高的抑制活性, 而化合物3i和3j在酶的活性位点之外, 导致无抑制活性.化合物3k和3l的活性差异主要是由于化合物3l与PTP1B键合的氢键数目多于化合物3k, 所以二者比较化合物3l的活性较高.

通过对目标化合物与Cdc25B/PTP1B蛋白酶中可能的结合位点与结合能力的研究发现, 酰基硫脲基团的引入是产生抑制活性的主要原因, 苯环上取代基的位置对活性也具有影响.

2. 结论

以(未)取代苯甲酸和氯化亚砜为原料, 合成出了芳甲酰氯1, 再在超声波辐射与固-液相转移催化下经两步反应合成出14个目标化合物, 即1-芳甲酰基-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲衍生物3a~3n.该合成方法具有反应时间短, 操作简便, 产率高等优点.对所合成的目标化合物3a~3n进行了Cdc25B和PTP1B抑制活性的评价, 并利用分子对接初步研究了结构-活性的关系.实验结果显示, 大部分目标化合物对Cdc25B和PTP1B表现出良好的抑制活性, 其中3n对Cdc25B的抑制活性最高, 3l对PTP1B的抑制活性最高.值得注意的是, 化合物3a~3f、3h和3k~3n对Cdc25B和PTP1B均具有抑制活性, 其中3n对Cdc25B和PTP1B的抑制活性最高.分子对接的研究结果显示, 目标化合物对Cdc25B/PTP1B的抑制作用主要是由氢键引起.酰基硫脲基团的引入是产生抑制活性的主要原因, 苯环上取代基的位置对活性也具有影响.这些活性的目标化合物是潜在的Cdc25B和PTP1B抑制剂, 在癌症和糖尿病的治疗方面具有潜在的应用价值.本文研究结果对后续的化合物结构改造和修饰具有指导意义.

3. 实验部分

3.1 仪器与试剂

X-5显微熔点测定仪(温度计未经校正); 德国TENSOR 27型FT-IR红外光谱仪, KBr压片; 德国BRUKER 500 MHz核磁共振仪, DMSO-d₆为溶剂, TMS为内标; 德国Elementar公司Vario EL型元素分析仪; KQ-500B型超声波清洗器.所用试剂均为分析纯.

3.2 目标化合物3的合成

在100 mL干燥的锥形瓶中加入1.2 mmol酰氯(按参考文献[43]合成)、1.8 mmol NH₄SCN、0.12 g PEG-400和10 mL二氯甲烷, 然后放入超声波清洗器中超声辐射1 h, 超声波辐射过程中控制超声波清洗槽中的水温在15~30 ℃, 即得到酰基异硫氰酸酯中间体2.不经分离直接进行下一步反应.

向上述反应瓶中加入1 mmol 3-氨基-9-乙基咔唑和5 mL二氯甲烷, 继续在原温度下超声波辐射作用1 h后停止反应.向反应瓶中加入30 mL水, 充分振荡以便溶解生成的无机盐.然后用CH₂Cl₂萃取两次(15 mL×2), 分出有机相, 水浴蒸去CH₂Cl₂, 得到黄色固体粗产物.用DMF重结晶后即得到纯的目标化合物3.它们均为新化合物.

1-苯甲酰基-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3a):淡黄色针状晶体, 产率82.4%. m.p. 205.1~206.3 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.68 (s, 1H, NH_a), 11.59 (s, 1H, NH_b), 8.41 (s, 1H, Cz-H₄), 8.16 (d, J＝8.0 Hz, 1H, Cz-H₂), 8.02 (d, J＝7.5 Hz, 2H, ArH), 7.68 (t, J＝7.5 Hz, 1H, ArH), 7.66 (s, 2H, Cz-H₁, H₅), 7.63 (d, J＝8.5 Hz, 1H, Cz-H₈), 7.57 (t, J＝7.8 Hz, 2H, ArH), 7.48 (t, J＝7.8 Hz, 1H, Cz-H₇), 7.22 (t, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₆), 4.47 (q, J＝7.2 Hz, 2H, CH₂), 1.34 (t, J＝7.3 Hz, 3H, CH₃); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 125 MHz) δ: 179.6 (C＝S), 168.4 (C＝O), 140.0, 137.9, 133.1, 132.2, 129.7, 128.7, 128.4, 126.0, 123.4, 122.0, 121.9, 120.5, 118.9, 116.8, 109.3, 108.9 (aromatic), 37.1 (CH₂), 13.7 (CH₃); IR (KBr) ν: 3416, 3325, 3228, 3158, 3050, 2970, 2889, 1671, 1598, 1577, 1556, 1532, 1490, 1476, 1336, 1146 cm^-1. Anal. calcd for C₂₂H₁₉N₃OS: C 70.75, H 5.13, N 11.25; found C 70.54, H 4.96, N 11.06.

1-(3-甲基苯甲酰基)-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3b):淡黄色针状晶体, 产率72.5%. m.p. 146.9~147.3 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.71 (s, 1H, NH_a), 11.52 (s, 1H, NH_b), 8.41 (s, 1H, Cz-H₄), 8.16 (d, J＝8.0 Hz, 1H, Cz-H₂), 7.88 (s, 1H, ArH), 7.82 (d, J＝7.5 Hz, 1H, ArH), 7.67 (dd, J＝8.8, 1.8 Hz, 1H, Cz-H₅), 7.65 (d, J＝8.5 Hz, 1H, Cz-H₁), 7.63 (d, J＝8.5 Hz, 1H, Cz-H₈), 7.49 (d, J＝7.5 Hz, 1H, ArH), 7.48 (t, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₇), 7.44 (t, J＝7.5 Hz, 1H, ArH), 7.22 (t, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₆), 4.47 (q, J＝7.2 Hz, 2H, CH₂), 1.34 (t, J＝7.3 Hz, 3H, CH₃); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 125 MHz) δ: 179.6 (C＝S), 168.4 (C＝O), 140.0, 137.9, 137.8, 133.7, 132.1, 129.7, 129.1, 128.4, 126.0, 125.8, 123.4, 122.0, 121.9, 120.5, 118.9, 116.8, 109.3, 108.9 (aromatic), 37.1 (CH₂), 20.8 (CH₃), 13.7 (CH₃); IR (KBr) ν: 3415, 3214, 3161, 3048, 2975, 2886, 1666, 1602, 1581, 1532, 1508, 1491, 1335, 1145 cm^-1. Anal. calcd for C₂₃H₂₁N₃OS: C 71.29, H 5.46, N 10.84; found C 71.47, H 5.23, N 10.98.

1-(4-甲基苯甲酰基)-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3c):橙黄色针状晶体, 产率78.5%. m.p. 198.5~199.9 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.73 (s, 1H, NH_a), 11.48 (s, 1H, NH_b), 8.40 (s, 1H, Cz-H₄), 8.16 (d, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₂), 7.95 (d, J＝8.5 Hz, 2H, ArH), 7.67 (dd, J₁＝9.0 Hz, J₂＝1.5 Hz, 1H, Cz-H₅), 7.65 (d, J＝8.5 Hz, 1H, Cz-H₁), 7.63 (d, J＝8.0 Hz, 1H, Cz-H₈), 7.48 (t, J＝7.8 Hz, 1H, Cz-H₇), 7.37 (d, J＝8.0 Hz, 2H, ArH), 7.22 (t, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₆), 4.47 (q, J＝7.2 Hz, 2H, CH₂), 1.34 (t, J＝7.3 Hz, 3H, CH₃); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 125 MHz) δ: 179.7 (C＝S), 168.2(C＝O), 143.6, 140.0, 137.8, 129.7, 129.3, 129.0, 128.7, 126.0, 123.4, 122.0, 121.9, 120.5, 118.9, 116.8, 109.3, 108.9 (aromatic), 37.1 (CH₂), 21.1 (CH₃), 13.7 (CH₃); IR (KBr) ν: 3418, 3309, 3220, 3158, 3048, 2970, 2885, 1667, 1601, 1584, 1546, 1528, 1500, 1469, 1330, 1149 cm^-1. Anal. calcd for C₂₃H₂₁N₃OS: C 71.29, H 5.46, N 10.84; found C 71.54, H 5.62, N 10.62.

1-(3-甲氧基苯甲酰基)-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3d):黄色针状晶体, 产率72.7%. m.p. 178.0~178.8 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.68 (s, 1H, NH_a), 11.59 (s, 1H, NH_b), 8.40 (s, 1H, Cz-H₄), 8.16 (d, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₂), 7.66 (s, 2H, Cz-H₁, H₅), 7.63 (d, J＝8.5 Hz, 1H, Cz-H₈), 7.61 (d, J＝8.0 Hz, 1H, ArH), 7.58 (s, 1H, ArH), 7.48 (t, J＝7.8 Hz, 1H, Cz-H₇), 7.47 (t, J＝7.8 Hz, 1H, ArH), 7.24 (dd, J＝7.8, 2.8 Hz, 1H, ArH), 7.22 (t, J＝7.3 Hz, 1H, Cz-H₆), 4.47 (q, J＝7.0 Hz, 2H, CH₂), 1.34 (t, J＝7.0 Hz, 3H, CH₃); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 125 MHz) δ: 179.6 (C＝S), 168.1 (C＝O), 159.0, 140.0, 137.9, 133.5, 129.7, 129.6, 126.0, 123.4, 122.0, 121.9, 120.5, 119.4, 118.9, 116.8, 113.3, 109.3, 108.9 (aromatic), 55.4 (CH₃O), 37.1 (CH₂), 13.7 (CH₃); IR (KBr) ν: 3416, 3293, 3228, 3164, 3051, 2970, 2889, 1671, 1580, 1556, 1528, 1487, 1340, 1274, 1142 cm^-1. Anal. calcd for C₂₃H₂₁N₃O₂S: C 68.46, H 5.25, N 10.41; found C 68.27, H 5.36, N 10.58.

1-(4-甲氧基苯甲酰基)-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3e):淡黄针状晶体, 产率81.4%. m.p. 195.4~196.1 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.78 (s, 1H, NH_a), 11.39 (s, 1H, NH_b), 8.40 (s, 1H, Cz-H₄), 8.16 (d, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₂), 8.06 (d, J＝9.0 Hz, 2H, ArH), 7.67 (dd, J＝9.0, 1.5 Hz, 1H, Cz-H₅), 7.65 (d, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₁), 7.63 (d, J＝8.0 Hz, 1H, Cz-H₈), 7.48 (t, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₇), 7.21 (t, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₆), 7.11 (d, J＝8.5 Hz, 2H, ArH), 4.47 (q, J＝7.2 Hz, 2H, CH₂), 1.34 (t, J＝7.0 Hz, 3H, CH₃); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 125 MHz) δ: 179.7 (C＝S), 167.6 (C＝O), 163.2, 140.0, 137.8, 130.9, 129.7, 126.0, 123.9, 123.4, 122.0, 121.9, 120.5, 118.9, 116.8, 113.8, 109.3, 108.9 (aromatic), 55.6 (CH₃O), 37.1 (CH₂), 13.7 (CH₃); IR (KBr) ν: 3418, 3225, 3043, 2975, 2876, 1660, 1601, 1587, 1559, 1532, 1493, 1473, 1336, 1250, 1142 cm^-1. Anal. calcd for C₂₃H₂₁N₃O₂S: C 68.46, H 5.25, N 10.41; found C 68.23, H 5.07, N 10.56.

1-(2-氯苯甲酰基)-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3f):黄色针状晶体, 产率72.4%. m.p. 180.4~181.4 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.41 (s, 1H, NH_a), 12.02 (s, 1H, NH_b), 8.41 (d, J＝2.0 Hz, 1H, Cz-H₄), 8.18 (d, J＝8.0 Hz, 1H, Cz-H₂), 7.61~7.73 (m, 4H, Cz-H₁, H₅, H₈, ArH), 7.53~7.61 (m, 2H, ArH), 7.43~7.53 (m, 2H, Cz-H₇, ArH), 7.22 (td, J＝7.5, 1.0 Hz, 1H, Cz-H₆), 4.47 (q, J＝7.2 Hz, 2H, CH₂), 1.34 (t, J＝7.0 Hz, 3H, CH₃); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 125 MHz) δ: 179.2 (C＝S), 167.8 (C＝O), 140.0, 137.9, 134.4, 132.0, 130.0, 129.6, 129.5, 129.3, 127.1, 126.0, 123.4, 122.0, 121.9, 120.6, 118.9, 116.9, 109.3, 108.9 (aromatic), 37.1 (CH₂), 13.7 (CH₃); IR (KBr) ν: 3376, 3220, 3173, 3048, 2975, 2892, 1668, 1591, 1538, 1493, 1473, 1340, 1152 cm^-1. Anal. calcd for C₂₂H₁₈ClN₃OS: C 64.78, H 4.45, N 10.30; found C 64.92, H 4.25, N 10.18.

1-(3-氯苯甲酰基)-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3g):亮黄色针状晶体, 产率80.9%. m.p. 185.1~185.7 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.55 (s, 1H, NH_a), 11.76 (s, 1H, NH_b), 8.40 (s, 1H, Cz-H₄), 8.16 (d, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₂), 8.07 (t, J＝2.0 Hz, 1H, ArH), 7.95 (ddd, J＝8.0, 2.1, 0.9 Hz, 1H, ArH), 7.66 (s, 2H, Cz-H₁, H₅), 7.63 (d, J＝8.5 Hz, 1H, Cz-H₈), 7.59 (t, J＝8.0 Hz, 1H, ArH), 7.48 (td, J＝7.6, 1.3 Hz, 1H, Cz-H₇), 7.22 (td, J＝7.5, 0.5 Hz, 1H, Cz-H₆), 4.47 (q, J＝7.2 Hz, 2H, CH₂), 1.34 (t, J＝7.0 Hz, 3H, CH₃); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 125 MHz) δ: 179.4 (C＝S), 167.0 (C＝O), 140.0, 137.9, 134.3, 133.1, 132.7, 130.3, 129.6, 128.4, 127.4, 126.0, 123.4, 122.0, 121.9, 120.5, 118.9, 116.8, 109.3, 108.9 (aromatic), 37.1 (CH₂), 13.7 (CH₃); IR (KBr) ν: 3210, 3162, 3048, 2972, 2875, 1677, 1530, 1489, 1471, 1332, 1154 cm^-1. Anal. calcd for C₂₂H₁₈ClN₃OS: C 64.78, H 4.45, N 10.30; found C 64.94, H 4.32, N 10.51.

1-(4-氯苯甲酰基)-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3h):黄色针状晶体, 产率82.5%. m.p. 190.1~191.7 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.59 (s, 1H, NH_a), 11.70 (s, 1H, NH_b), 8.40 (s, 1H, Cz-H₄), 8.16 (d, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₂), 8.03 (d, J＝8.5 Hz, 2H, ArH), 7.66 (s, 2H, Cz-H₁, H₅), 7.63 (d, J＝7.5 Hz, 2H, Cz-H₈, ArH), 7.48 (t, J＝7.8 Hz, 1H, Cz-H₇), 7.22 (t, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₆), 4.47 (q, J＝7.2 Hz, 2H, CH₂), 1.34 (t, J＝7.0 Hz, 3H, CH₃); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 125 MHz) δ: 179.5 (C＝S), 167.3 (C＝O), 140.0, 137.93, 137.86, 131.1, 130.6, 129.6, 128.5, 126.0, 123.4, 122.0, 121.9, 120.5, 118.9, 116.8, 109.3, 108.9 (aromatic), 37.1 (CH₂), 13.7 (CH₃); IR (KBr) ν: 3402, 3319, 3215, 3183, 3053, 2970, 2887, 1667, 1594, 1532, 1490, 1469, 1340, 1146 cm^-1. Anal. calcd for C₂₂H₁₈ClN₃OS: C 64.78, H 4.45, N 10.30; found C 64.56, H 4.31, N 10.56.

1-(2-氟苯甲酰基)-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3i):亮黄色针状晶体, 产率83.4%. m.p. 183.5~184.7 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.43 (s, 1H, NH_a), 11.72 (s, 1H, NH_b), 8.40 (s, 1H, Cz-H₄), 8.17 (d, J＝8.0 Hz, 1H, Cz-H₂), 7.75 (t, J＝7.5 Hz, 1H, ArH), 7.60~7.70 (m, 4H, Cz-H₁, H₅, H₈, ArH), 7.48 (t, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₇), 7.38 (t, J＝9.3 Hz, 1H, ArH), 7.37 (t, J＝7.5 Hz, 1H, ArH), 7.22 (t, J＝7.3 Hz, 1H, Cz-H₆), 4.47 (q, J＝7.2 Hz, 2H, CH₂), 1.34 (t, J＝7.0 Hz, 3H, CH₃); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 125 MHz) δ: 179.1 (C＝S), 165.4 (C＝O), 159.3 (d, ¹J＝249.1 Hz), 140.0, 137.9, 134.1 (d, ³J＝8.6 Hz), 130.4 (d, ⁴J＝1.5 Hz), 129.5, 126.0, 124.6 (d, ³J＝3.3 Hz), 123.4, 122.2 (d, ²J＝13.8 Hz), 122.0, 121.9, 120.5, 118.9, 117.0, 116.2 (d, ²J＝21.5 Hz), 109.3, 108.9 (aromatic), 37.1 (CH₂), 13.7 (CH₃); IR (KBr) ν: 3423, 3330, 3210, 3168, 3048, 2970, 2866, 1671, 1598, 1577, 1532, 1507, 1490, 1476, 1333, 1142 cm^-1. Anal. calcd for C₂₂H₁₈FN₃OS: C 67.50, H 4.63, N 10.73; found C 67.74, H 4.84, N 10.86.

1-(3-氟苯甲酰基)-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3j):黄色固体粉末, 产率79.5%. m.p. 183.6~184.3 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.56 (s, 1H, NH_a), 11.69 (s, 1H, NH_b), 8.40 (s, 1H, Cz-H₄), 8.16 (d, J＝8.0 Hz, 1H, Cz-H₂), 7.80~7.90 (m, 2H, ArH), 7.58~7.70 (m, 4H, Cz-H₁, H₅, H₈, ArH), 7.54 (td, J＝8.6, 1.7 Hz, 1H, ArH), 7.48 (t, J＝7.3 Hz, 1H, Cz-H₇), 7.22 (t, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₆), 4.47 (q, J＝7.0 Hz, 2H, CH₂), 1.34 (t, J＝7.3 Hz, 3H, CH₃); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 125 MHz) δ: 179.4 (C＝S), 166.9 (d, ⁴J＝2.5 Hz, C＝O), 161.6 (d, ¹J＝243.3 Hz), 140.0, 137.9, 134.5 (d, ³J＝7.3 Hz), 130.6 (d, ³J＝8.0 Hz), 129.6, 126.0, 124.9 (d, ⁴J＝2.6 Hz), 123.4, 122.0, 121.9, 120.5, 119.9 (d, ²J＝21.0 Hz), 118.9, 116.8, 115.5 (d, ²J＝23.4 Hz), 109.3, 108.9 (aromatic), 37.1 (CH₂), 13.7 (CH₃); IR (KBr) ν: 3424, 3333, 3229, 3170, 3049, 2965, 2888, 1674, 1591, 1559, 1532, 1493, 1479, 1344, 1135 cm^-1. Anal. calcd for C₂₂H₁₈FN₃OS: C 67.50, H 4.63, N 10.73; found C 67.24, H 4.82, N 10.55.

1-(4-氟苯甲酰基)-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3k):淡黄色针状晶体, 产率87.7%. m.p. 210.1~211.3 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.63 (s, 1H, NH_a), 11.64 (s, 1H, NH_b), 8.40 (s, 1H, Cz-H₄), 8.16 (d, J＝8.0 Hz, 1H, Cz-H₂), 8.11 (dd, J＝8.8, 5.3 Hz, 2H, ArH), 7.66 (s, 2H, Cz-H₁, H₅), 7.63 (d, J＝8.0 Hz, 1H, Cz-H₈), 7.48 (t, J＝7.8 Hz, 1H, Cz-H₇), 7.40 (t, J＝8.8 Hz, 2H, ArH), 7.22 (t, J＝7.3 Hz, 1H, Cz-H₆), 4.47 (q, J＝7.2 Hz, 2H, CH₂), 1.34 (t, J＝7.3 Hz, 3H, CH₃); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 125 MHz) δ: 179.6 (C＝S), 167.3 (C＝O), 164.9 (d, ¹J＝250.1 Hz), 140.0, 137.9, 131.7 (d, ³J＝9.5 Hz), 129.6, 128.7 (d, ⁴J＝2.8 Hz), 126.0, 123.4, 122.0, 121.9, 120.5, 118.9, 116.8, 115.5 (d, ²J＝22.0 Hz), 109.3, 108.9 (aromatic), 37.1 (CH₂), 13.7 (CH₃); IR (KBr) ν: 3418, 3330, 3215, 3173, 3059, 2970, 2887, 1670, 1598, 1584, 1528, 1493, 1476, 1333, 1146 cm^-1. Anal. calcd for C₂₂H₁₈FN₃OS: C 67.50, H 4.63, N 10.73; found C 67.70, H 4.48, N 10.57.

1-(2-硝基苯甲酰基)-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3l):黄色小针状晶体, 产率73.2%. m.p. 224.7~225.9 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.32 (s, 1H, NH_a), 12.16 (s, 1H, NH_b), 8.42 (d, J＝1.5 Hz, 1H, Cz-H₄), 8.25 (d, J＝8.0 Hz, 1H, ArH), 8.19 (d, J＝7.5 Hz, 2H, Cz-H₂), 7.93 (t, J＝7.5 Hz, 1H, ArH), 7.84 (d, J＝8.0 Hz, 1H, ArH), 7.82 (td, J＝8.0, 1.0 Hz, 1H, ArH), 7.69 (dd, J＝9.0, 2.0 Hz, 1H, Cz-H₅), 7.66 (d, J＝8.5 Hz, 1H, Cz-H₁), 7.64 (d, J＝8.5 Hz, 1H, Cz-H₈), 7.49 (td, J＝7.6, 0.8 Hz, 1H, Cz-H₇), 7.22 (t, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₆), 4.48 (q, J＝7.0 Hz, 2H, CH₂), 1.34 (t, J＝7.3 Hz, 3H, CH₃); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 125 MHz) δ: 179.1 (C＝S), 167.6 (C＝O), 145.5, 140.0, 137.9, 134.6, 131.7, 130.7, 129.5, 129.4, 126.1, 124.2, 123.4, 122.0, 121.9, 120.6, 118.9, 117.0, 109.3, 108.9 (aromatic), 37.1 (CH₂), 13.7 (CH₃); IR (KBr) ν: 3423, 3381, 3152, 3064, 2986, 1688, 1537, 1490, 1473, 1347, 1170 cm^-1. Anal. calcd for C₂₂H₁₈N₄O₃S: C 63.14, H 4.34, N 13.39; found C 63.41, H 4.52, N 13.16.

1-(3-硝基苯甲酰基)-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3m):黄色固体粉末, 产率86.1%. m.p. 209.5~210.4 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.50 (s, 1H, NH_a), 12.04 (s, 1H, NH_b), 8.82 (s, 1H, ArH), 8.50 (d, J＝8.5 Hz, 1H, ArH), 8.38~8.45 (m, 2H, Cz-H₄, ArH), 8.17 (d, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₂), 7.86 (t, J＝8.0 Hz, 1H, ArH), 7.67 (s, 2H, Cz-H₁, H₅), 7.64 (d, J＝8.0 Hz, 1H, Cz-H₈), 7.49 (t, J＝7.8 Hz, 1H, Cz-H₇), 7.22 (t, J＝7.3 Hz, 1H, Cz-H₆), 4.48 (q, J＝7.0 Hz, 2H, CH₂), 1.34 (t, J＝7.3 Hz, 3H, CH₃); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 125 MHz) δ: 179.3 (C＝S), 166.3 (C＝O), 147.4, 140.0, 137.9, 135.1, 133.9, 130.1, 129.6, 127.2, 126.0, 123.7, 123.4, 122.0, 121.9, 120.5, 118.9, 116.8, 109.3, 108.9 (aromatic), 37.1 (CH₂), 13.7 (CH₃); IR (KBr) ν: 3408, 3230, 3179, 3069, 2975, 2892, 1681, 1598, 1577, 1538, 1525, 1490, 1473, 1347, 1333, 1152 cm^-1. Anal. calcd for C₂₂H₁₈N₄O₃S: C 63.14, H 4.34, N 13.39; found C 62.97, H 4.13, N 13.54.

1-(4-硝基苯甲酰基)-3-(9-乙基-咔唑-3-基)硫脲(3n):橙黄色针状晶体, 产率89.3%. m.p. 213.7~214.8 ℃; ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 12.48 (s, 1H, NH_a), 11.96 (s, 1H, NH_b), 8.41 (s, 1H, Cz-H₄), 8.36 (d, J＝8.5 Hz, 2H, ArH), 8.21 (d, J＝8.5 Hz, 2H, ArH), 8.16 (d, J＝8.0 Hz, 1H, Cz-H₂), 7.67 (s, 2H, Cz-H₁, H₅), 7.64 (d, J＝8.5 Hz, 1H, Cz-H₈), 7.49 (t, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₇), 7.22 (t, J＝7.5 Hz, 1H, Cz-H₆), 4.47 (q, J＝7.0 Hz, 2H, CH₂), 1.34 (t, J＝7.0 Hz, 3H, CH₃); ¹³C NMR (DMSO-d₆, 125 MHz) δ: 179.2 (C＝S), 166.8 (C＝O), 149.8, 140.0, 138.2, 137.9, 130.2, 129.6, 126.0, 123.3, 121.94, 121.89, 120.5, 118.9, 116.8, 109.3, 109.0 (aromatic), 37.1 (CH₂), 13.7 (CH₃); IR (KBr) ν: 3396, 3306, 3229, 3170, 3045, 2972, 2892, 1671, 1601, 1580, 1548, 1537, 1526, 1490, 1473, 1343, 1339, 1149 cm^-1. Anal. calcd for C₂₂H₁₈N₄O₃S: C 63.14, H 4.34, N 13.39; found C 62.99, H 4.48, N 13.22.

3.3 目标化合物生物活性测试

目标化合物对Cdc25B和PTP1B的抑制活性筛选实验方法:按照参考文献[47, 48]的方法进行.

3.4 目标化合物3与Cdc25B/PTP1B的分子对接

从RCSB的PDB库(http://www.rcsb.org)下载Cdc25B蛋白晶体结构(PDB ID:1QB0)^[49]和PTP 1B蛋白晶体结构(PDB ID:1NNY)^[50].采用Dockingserver软件进行分子对接研究.

辅助材料(Supporting Information) 所有目标化合物的IR、¹H NMR和¹³C NMR谱图.这些材料可以免费从本刊网站(http://sioc-journal.cn/)上下载.

1. [1]
  Nitulescu, G. M.; Draghici, C.; Olaru, O. T.; Matei, L.; Ioana, A.; Dragu, L. D.; Bleotu, C. Bioorg. Med. Chem. 2015, 23, 5799. doi: 10.1016/j.bmc.2015.07.010
2. [2]
  Jin, L.; Qu, H. E.; Huang, X. C.; Pan, Y. M.; Liang, D.; Chen, Z. F.; Wang, H. S.; Zhang, Y. Int. J. Mol. Sci. 2015, 16, 14571. doi: 10.3390/ijms160714571
3. [3]
  Yun, T.; Qin, T.; Liu, Y.; Lai, L. H. Eur. J. Med. Chem. 2016, 124, 229. doi: 10.1016/j.ejmech.2016.08.043
4. [4]
  Gunasekaran, N.; Vadivel, V.; Halcovitch, N. R.; Tiekink, E. R. T. Chem. Data Collect. 2017, 9, 263. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2405830016300659
5. [5]
  Kulabaş, N.; Özakpınar, Ö. B.; Özsavcı, D.; Leyssen, P.; Neyts, J.; Kü ükgüzel, İ. Marmara Pharm. J. 2017, 21, 371. doi: 10.12991/marupj.300913
6. [6]
  Banaei, A.; Shiran, J. A.; Saadat, A.; Ardabili, F. F.; McArdle, P. J. Mol. Struct. 2015, 1099, 427. doi: 10.1016/j.molstruc.2015.06.074
7. [7]
  Tahir, S.; Badshah, A.; Hussain, R. A.; Tahir, M. N.; Tabassum, S.; Patujo, J. A.; Rauf, M. K. J. Mol. Struct. 2015, 1099, 215. doi: 10.1016/j.molstruc.2015.06.024
8. [8]
  Cui, P. L.; Li, X. L.; Zhu, M. Y.; Wang, B. H.; Liu, J.; Chen, H. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2017, 27, 2234. doi: 10.1016/j.bmcl.2016.11.060
9. [9]
  Zullkiplee, W. S. H. W.; Ariff, M. A. M.; Hussain, H.; Khairul W. M.; Ngaini, Z. Phosphorus, Sulfur Silicon Relat. Elem. 2016, 191, 1329. doi: 10.1080/10426507.2016.1192627
10. [10]
  Khairul, W. M.; Ariffin, A. A.; Ismail, N.; Daud, A. I. Educ. Jsmt. 2016, 3, 13. http://iopscience.iop.org/issue/1757-899X/160/1
11. [11]
  Halim, A. N. A.; Ngaini, Z. Phosphorus, Sulfur Silicon Relat. Elem. 2017, 192, 1. doi: 10.1080/10426507.2016.1223076
12. [12]
  Sun, C. W.; Huang, H.; Feng, M. Q.; Shi, X. L.; Zhang, X. D.; Zhou, P. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2006, 16, 162. doi: 10.1016/j.bmcl.2005.09.033
13. [13]
  Burgeson, J. R.; Moore, A. L.; Boutilier, J. K.; Cerruti, N. R.; Gharaibeh, D. N.; Lovejoy, C. E.; Amberg, S. M.; Hruby, D. E.; Tyavanagimatt, S. R.; Allen Ⅲ, R. D.; Dai, D. C. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2012, 22, 4263. doi: 10.1016/j.bmcl.2012.05.035
14. [14]
  Dobrikov, G. M.; Valcheva, V.; Nikolova, Y.; Ugrunova, I.; Pasheva, E.; Dimitrov, V. Eur. J. Med. Chem. 2013, 63, 468. doi: 10.1016/j.ejmech.2013.02.034
15. [15]
  Saeed, A.; Shah, M. S.; Larik, F. A.; Khan, S. U.; Channar, P. A.; Flörke, U.; Iqbal, J. Med. Chem. Res. 2017, 26, 1635. doi: 10.1007/s00044-017-1829-6
16. [16]
  Wang, M. J.; Nan, X.; Feng, G.; Yu, H. T.; Hu, G. F.; Liu, Y.-Q. Ind. Crop. Prod. 2014, 55, 11. doi: 10.1016/j.indcrop.2014.02.007
17. [17]
  Chang, Y. N.; Zhang, J. W.; Chen, X. L..; Li, Z.; Xu, X. Y. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2017, 27, 2641. doi: 10.1016/j.bmcl.2016.12.065
18. [18]
  Zhang, Q.; Zhao, B. H.; Song, Y. Y.; Hua, C. W.; Gou, X. F.; Chen B.; Zhao, J. L. Heteroat. Chem. 2015, 26, 348. doi: 10.1002/hc.2015.26.issue-5
19. [19]
  Saeed, A.; Qamar R.; Fattah T. A.; Flörke, U.; Erben, M. F. Res. Chem. Intermed. 2017, 43, 3053. doi: 10.1007/s11164-016-2811-5
20. [20]
  Murali, K.; Sparkes, H. A.; Prasad, K. J. R. Eur. J. Med. Chem. 2017, 128, 319. doi: 10.1016/j.ejmech.2017.02.009
21. [21]
  Sun, L. Q.; Wu, Y. B.; Liu, Y. H.; Chen, X. F.; Hu, L. X. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2017, 27, 261. doi: 10.1016/j.bmcl.2016.11.068
22. [22]
  Dineshkumar, B.; Mitra, A.; Mahadevappa, M. Int. J. Phytomed. 2010, 2, 22. http://www.jcimjournal.com/en/showAbstrPage.aspx?articleID=jcim20110803
23. [23]
  Wang, G. C.; Wang, J.; He, D. X.; Li, J.; Peng, Z. Y. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2016, 26, 2806. doi: 10.1016/j.bmcl.2016.04.071
24. [24]
  Kong, X. Q.; Zhang, H. Z.; Cao, C. S.; Zhou, S. L.; Pang, G. S.; Shi, Y. H. Bioorg. Med. Chem. 2016, 24, 1376. doi: 10.1016/j.bmc.2016.02.013
25. [25]
  Bandgar, B. P.; Adsul, L. K.; Chavan, H. V.; Jalde, S. S.; Shringare, S. N.; Shaikh, R.; Meshram, R. J.; Gacche, R. N.; Masand, V. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2012, 22, 2539.
26. [26]
  Zhu, D. Q.; Chen, M. H.; Li, M.; Luo, B. L.; Zhao, Y.; Huang, P.; Xue, F. T.; Rapposelli, S.; Pi, R. B.; Wen, S. J. Eur. J. Med. Chem. 2013, 68, 81. doi: 10.1016/j.ejmech.2013.07.029
27. [27]
  Hieda, Y.; Anraku, M; Choshi, T.; Tomida, H.; Fujioka, H.; Hatae, N.; Hori, O.; Hirose, J.; Hibino, S. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2014, 24, 3530. doi: 10.1016/j.bmcl.2014.05.050
28. [28]
  Börger, C.; Brütting, C.; Julich-Fruner, K. K.; Hesse, R.; Kumar, V. P.; Kutz, S. K.; Rönnefahrt, M.; Thomas, C.; Wan, B. J.; Franzblau, S. G.; Knölker, H. J. Bioorg. Med. Chem. 2017, 25(22), 6167. doi: 10.1016/j.bmc.2016.12.038
29. [29]
  Ma, Q. G.; Tian, J.; Yang, J. B.; Wang, A. G.; Ji, T. F.; Wang, Y. G.; Su, Y. L. Fitoterapia 2013, 87, 1. doi: 10.1016/j.fitote.2013.03.003
30. [30]
  Ty, N.; Dupeyre, G.; Chabot, G. G.; Seguin, J.; Quentin, L.; Chiaroni, A.; Tillequin, F.; Scherman, D.; Michel, S.; Cachet, X.. Eur. J. Med. Chem. 2010, 45, 3726. doi: 10.1016/j.ejmech.2010.05.022
31. [31]
  Akué-Gédu, R.; Nauton, L.; Théry, V.; Bain, J.; Cohen, P.; Anizon, F.; Moreau, P. Bioorg. Med. Chem. 2010, 18, 6865. doi: 10.1016/j.bmc.2010.07.036
32. [32]
  Suchaud, V.; Gavara, L.; Saugues, E.; Nauton, L.; Théry, V.; Anizon, F.; Moreau, P. Bioorg. Med. Chem. 2013, 21, 4102. doi: 10.1016/j.bmc.2013.05.011
33. [33]
  Lampropoulou, E.; Manioudaki, M.; Fousteris, M.; Koutsourea, A.; Nikolaropoulos, S.; Papadimitriou, E. Biomed. Pharmacother. 2011, 65, 142. doi: 10.1016/j.biopha.2011.02.006
34. [34]
  Yoon, H. J.; Kong, S. Y.; Park, M. H.; Cho, Y. S.; Kim, S. E.; Shin, J. Y.; Jung, S. H.; Lee, J.; Farhanullah; Kim, H. J.; Lee, J. Bioorg. Med. Chem. 2013, 21, 7165. doi: 10.1016/j.bmc.2013.08.066
35. [35]
  Thiratmatrakul, S.; Yenjai, C.; Waiwut, P.; Vajragupta, O.; Reubroycharoen, P.; Tohda, M.; Boonyarat, C. Eur. J. Med. Chem. 2014, 75, 21. doi: 10.1016/j.ejmech.2014.01.020
36. [36]
  Rosenker, K. M. G.; Paquette, W. D.; Johnston, P. A.; Sharlow, E. R.; Vogt, A.; Bakan, A.; Lazo, J. S.; Wipf, P. Bioorg. Med. Chem. 2015, 23, 2810. doi: 10.1016/j.bmc.2015.01.043
37. [37]
  Li, Y.-J.; Yu, Y.; Jin, K.; Gao, L.-X.; Luo, T.-C..; Sheng, L.; Shao, X.; Li, J. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2014, 24, 4125. doi: 10.1016/j.bmcl.2014.07.055
38. [38]
  Vo, Q. H.; Nguyen, P. H.; Zhao, B. T.; Ali, M. Y.; Choi, J. S.; Min, B. S.; Nguyen, T. H.; Woo, M. H. Fitoterapia 2015, 103, 113. doi: 10.1016/j.fitote.2015.03.017
39. [39]
  梅雯雯, 郭跃伟, 李佳, 蔡妹艺, 马文泉, 龚景旭, 王学东, 有机化学, 2016, 36, 533. http://kns.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?filename=yjhu201603010&dbname=CJFD&dbcode=CJFQMei, W.-W.; Guo, Y.-W.; Li, J.; Cai, M.-Y.; Ma, W.-Q.; Gong, J.-X.; Wang, X.-D. Chin. J. Org. Chem. 2016, 36, 533(in Chinese). http://kns.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?filename=yjhu201603010&dbname=CJFD&dbcode=CJFQ
40. [40]
  李英俊, 史相玲, 高立信, 靳焜, 盛丽, 吴疆红, 彭丽娜, 李佳, 有机化学, 2015, 35, 191. http://kns.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?filename=sysy201510051&dbname=CJFD&dbcode=CJFQLi, Y.-J.; Shi, X.-L.; Gao, L.-X.; Jin, K.; Sheng, L.; Wu, J.-H.; Peng, L.-N.; Li, J. Chin. J. Org. Chem. 2015, 35, 191(in Chinese). http://kns.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?filename=sysy201510051&dbname=CJFD&dbcode=CJFQ
41. [41]
  李英俊, 于洋, 靳焜, 高立信, 罗潼川, 盛丽, 邵昕, 李佳, 有机化学, 2015, 35, 129. http://kns.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?filename=yjhu201501012&dbname=CJFD&dbcode=CJFQLi, Y.-J.; Yu, Y.; Jin, K.; Gao, L.-X.; Luo, T.-C.; Sheng, L.; Sao. X.; Li, J. Chin. J. Org. Chem. 2015, 35, 129(in Chinese). http://kns.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?filename=yjhu201501012&dbname=CJFD&dbcode=CJFQ
42. [42]
  李英俊, 李继阳, 彭丽娜, 高立信, 靳焜, 盛丽, 张楠, 王思远, 李佳, 有机化学, 2017, 37, 485. http://kns.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?filename=yjhu201702022&dbname=CJFD&dbcode=CJFQLi, Y.-J.; Li, J.-Y.; Peng, L.-N.; Gao, L.-X.; Jin, K.; Sheng, L.; Zhang, N.; Wang, S.-Y.; Li, J. Chin. J. Org. Chem. 2017, 37, 485(in Chinese). http://kns.cnki.net/KCMS/detail/detail.aspx?filename=yjhu201702022&dbname=CJFD&dbcode=CJFQ
43. [43]
  魏太保, 陈继畴, 王秀春, 杨素铀, 高等学校化学学报, 1992, 13, 1217. http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-XBSF701.023.htmWei, T.-B.; Chen, J.-C.; Wang, X.-C.; Yang, S.-Y. Chem. J. Chin. Univ. 1992, 13, 1217(in Chinese). http://www.cnki.com.cn/Article/CJFDTOTAL-XBSF701.023.htm
44. [44]
  Okuniewski, A.; Rosiak, D.; Chojnacki, J.; Becker, B. Acta Crystallogr. 2017, 73, 52. https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/?term=Okuniewski A[Author]
45. [45]
  Saeed, A.; Ashraf, Z.; Erben, M. F.; Simpson, J. J. Mol. Struct. 2017, 1129, 283. doi: 10.1016/j.molstruc.2016.09.039
46. [46]
  Tabka, T.; Héron, J. F.; Gauduchon, P.; Le Talaer, J. Y.; Lancelot, J. C.; Rault, S.; Robba, M. Eur. J. Med. Chem. 1988, 23, 119. https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0065272508606704
47. [47]
  Huang, W. G.; Jiang, Y. Y.; Li, Q.; Li, J.; Li, J. Y.; Lu, W.; Cai, J. C. Tetrahedron 2005, 61, 1863. doi: 10.1016/j.tet.2004.12.033
48. [48]
  Sun, L. P.; Shen, Q.; Piao, H. H.; Ma, W. P.; Gao, L. X.; Zhang, W.; Nan, F. J.; Li, J.; Piao, H. R. Eur. J. Med. Chem. 2011, 46, 3630. doi: 10.1016/j.ejmech.2011.05.027
49. [49]
  Ge, Y. S.; Kamp, M. V. D.; Malaisree, M.; Liu, D.; Liu, Y.; Mulholland, A. J. J. Comput.-Aided Mol. Des. 2017, 31, 995. doi: 10.1007/s10822-017-0073-y
50. [50]
  Wiesmann, C.; Barr, K. J.; Kung, J.; Zhu, J.; Erlanson, D. A.; Shen, W.; Fahr, B. J.; Zhong, M.; Taylor, L.; Randal, M.; McDowell, R. S.; Hansen, S. K. Nat. Struct. Mol. Biol. 2004, 11, 730. doi: 10.1038/nsmb803

图式 1 化合物3a~3n的合成路线

Scheme 1 Synthetic route of target compounds 3a~3n

R = H (3a), 3-CH₃ (3b), 4-CH₃ (3c), 3-CH₃O (3d), 4-CH₃O (3e), 2-Cl (3f), 3-Cl (3g), 4-Cl (3h), 2-F (3i), 3-F (3j), 4-F (3k), 2-NO₂ (3l), 3-NO₂ (3m), 4-NO₂ (3n)

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图 1 目标化合物3的结构

Figure 1 Structures of target compounds 3

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图 2 化合物3l (A)、3m (B)和3n (C)与Cdc25B的分子对接

Figure 2 Molecular docking of compounds 3l (A), 3m (B) and 3n (C) with Cdc25B enzyme

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图 3 化合物3i (A)、3j (B)、3k (C)和3l (D)与PTP1B的分子对接

Figure 3 Molecular docking of compounds 3i (A), 3j (B), 3k (C) and 3l (D) with PTP1B enzyme

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表 1 目标化合物3对Cdc25B和PTP1B的抑制活性

Table 1. Inhibitory activities of target compounds 3 against Cdc25B and PTP1B

Compd.	Ar	Cdc25B^a		PTP1B^b
Compd.	Ar	Inhibition/% at 20 μg/mL	IC₅₀^c/(μg•mL^-1)	Inhibition/% at 20 μg/mL	IC₅₀^c/(μg•mL^-1)
3a	C₆H₅	92.15±0.35	2.25±0.21	61.10±0.37	10.39±3.16
3b	3-CH₃C₆H₄	93.29±2.78	1.50±0.58	80.92±4.87	6.04±0.51
3c	4-CH₃C₆H₄	93.91±0.18	1.41±0.22	86.81±1.05	4.25±0.74
3d	3-CH₃OC₆H₄	98.78±0.91	1.24±0.07	90.01±5.15	4.98±0.01
3e	4-CH₃OC₆H₄	94.47±0.18	1.11±0.04	99.00±0.33	4.46±0.99
3f	2-ClC₆H₄	94.95±0.79	2.34±0.13	82.01±6.01	6.12±1.67
3g	3-ClC₆H₄	92.61±0.42	1.16±0.07	37.79±1.88	—
3h	4-ClC₆H₄	97.24±0.96	1.08±0.11	52.14±3.39	9.74 ± 4.50
3i	2-FC₆H₄	87.94±0.58	3.40±0.15	46.10±4.18	—
3j	3-FC₆H₄	94.91±0.22	1.21±0.22	41.85±3.49	—
3k	4-FC₆H₄	91.57±1.41	2.42±0.81	81.80±9.69	5.83±0.81
3l	2-O₂NC₆H₄	93.65±0.84	5.31±0.59	77.00±1.25	3.59±1.15
3m	3-O₂NC₆H₄	94.26±0.82	0.62±0.01	86.35±1.25	5.14±0.92
3n	4-O₂NC₆H₄	99.12±0.81	0.49±0.12	68.14±0.37	4.24±0.49
^a 阳性对照药物: Na₃VO₄, IC₅₀＝0.28 μmol•L^-1. ^b 阳性对照药物:齐墩果酸, IC₅₀＝(1.18±0.17) μg/mL. ^c “-”:没计算, 因抑制率＜50%.

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表 2 目标化合物3l、3m和3n与Cdc25B的分子对接结果

Table 2. Molecular docking results of compounds 3l, 3mand 3n with Cdc25B (PDB ID:1QB0)

Compd.	No. of H-bond	H-bond	H-bond length/Å
3l	2	N3-PHE452	2.92
3l	2	N3-SER456	3.01
3m	3	N3-ASN442	3.29
		H6-TYR432	3.36
		H6-ASN442	2.57
3n	5	N2-THR390	2.75
		N1-VAL391	3.46
		N1-LEU398	3.32
		H5-ARG376	3.62
		H5-THR390	2.99

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表 3 目标化合物3i、3j、3k和3l与PTP1B的分子对接结果

Table 3. Molecular docking results of compounds 3i, 3j, 3kand 3l with PTP1B (PDB ID:1NNY)

Compd.	No. of H-bond	H-bond	H-bond length/Å
3i	1	N1-GLU132	3.18
3j	0	—	—
3k	2	N2-GLU101	3.20
3k	2	O1-THR164	3.33
3l	3	N3-HIS54	2.71
		N2-HIS54	2.96
		H6-SER55	3.62

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通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com

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沈阳化工大学材料科学与工程学院沈阳 110142