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• 自1947以来, 寨卡病毒已有70多年的发展历史, 但至今尚无特效药^[1~3].由于早期较轻的临床表现, 该病毒被人们渐渐忽视.直到2016年的巴西奥运会期间寨卡病毒的大规模爆发, 该病毒再次引起人们的关注^{[4, 5]}.寨卡病毒可通过血睾屏障导致男性生殖等问题^[6~8].寨卡病毒主要传播途径为蚊虫传播, 性传播和母婴传播^[9~11].由于其广泛的传播途径以及对婴儿的危害, 寨卡病毒引起了人们的恐慌^[12~14].更加引人关注的是:被寨卡病毒感染的孕妇可导致胎儿问题, 如流产、死产^[15]、小头畸形、胎儿和新生儿先天性畸形和视网膜病变等症状^{[16, 17]}.经过几十年的发展, 寨卡病毒正在潜移默化地危害着人类的健康, 且目前还没有特效药^[18].因此, 寨卡病毒特效药物的研发已迫在眉睫.

  寨卡病毒属黄病毒属、黄病毒科^{[19, 20]}, 是一种单链核糖核酸(RNA)虫媒病毒, 并具有十二面体结构^{[21, 22]}.由甲基转移酶和RNA聚合酶组成的多功能蛋白(NS5)是一种在寨卡病毒复制过程中起重要作用的蛋白组分, 它由甲基转移酶(5M5B)和C-末端RNA依赖性RNA聚合酶(RDRP)组成^[23]. 5M5B在参与病毒复制和宿主先天免疫应答过程中起重要作用, 因此它被用作潜在抗病毒药物开发的靶蛋白^[23].目前5M5B与S-腺苷甲硫氨酸的复合体已经被报道, 并确定了5M5B的结合位点^{[24, 25]}. 5M5B位点的氨基酸序列是非常保守的, 这给寨卡病毒抑制剂的研究带来了方便^{[26, 27]}.虽然许多药物被用作治疗寨卡病毒病, 如细胞因子(IFN-α, IFN-β和IFN-γ)^[28], 抗体, 多肽, 小分子化合物^{[29, 30]}, 索非布韦, 溴隐亭^[31]和其他药物如氯硝柳胺、硼替佐米、麦考酚酸等^[31].但是这些药物的疗效并不令人满意, 并且目前没有针对寨卡病毒的特异性药物.值得庆幸的是, 研究人员已经开发出了疫苗研发中心研发的一种抗寨卡病毒疫苗代号为VRC523, 它显示了很强的中和抗体和T细胞应答能力, 目前正在进行Ⅱ期临床试验^[32].

  传统的药物研发将耗费大量的人力、物力和财力, 计算机辅助药物设计(CADD)将克服这些缺点^[32], 大大提高工作效率.本实验采用CADD技术通过虚拟筛选模块得到抗寨卡病毒的先导化合物.最终, 我们根据先导化合物的结构进行改造, 合成了6个化合物并对其进行了药理测试.目标化合物1a~6a的合成路线见Scheme 1.

  图式 1

  

  图式 1.  目标化合物1a~6a的合成路线

  Scheme 1.  Synthetic routes of desired products 1a~6a

  Reagents and conditions: (ⅰ) dried THF, TEA, 0 ℃, 2 h; (ⅱ) dried THF, TEA, reflux, 4 h; (ⅲ) dried THF, TEA, reflux, 4 h; (ⅳ) dried THF, TEA, reflux, 4 h; (ⅴ) dried THF, TEA, 0 ℃, 2 h; (ⅵ) dried THF, TEA, reflux, 4 h

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  首先, 我们准备了受体蛋白与配体小分子, 如图 1所示.其次, 通过受体和配体的分子刚性对接, 我们得到了5000个具有高得分的化合物, 再对5000个小分子进行更加准确的全柔性对接, 最终筛选出60个打分较高的化合物.第三步通过药物设计软件Discovery Studio2017R2预测了60个分子的药物的吸收、分配、代谢、排泄和毒性(ADMET)性质, 选择了其中一个合物作为先导化合物.然后, 通过对先导化合物的结构修饰改造设计了50个新化合物.最后对50种新化合物的ADM-ET性质进行了再预测, 最终确定并合成了6个目标化合物.

  图 1

  

  图 1.  虚拟筛选过程

  Figure 1.  Virtual screening process

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  受体蛋白5M5B与先导化合物2a(图 2)的三维对接图见图 3a, 从图 3a可以看出, 先导化合物在受体蛋白位点空腔中未完全占据, 仍然有延伸片段的可能性.根据位点和配体的相对位置和侧链的结构, 合理地改变链的长度或增加片段, 以实现对先导化合物的结构优化.受体蛋白5M5B与先导化合物2a的二维对接图见图 3b.从图 3b可以看到先导化合物与受体蛋白氨基酸的结合情况.在理论上解释了寨卡病毒的抑制剂的作用机理.先导化合物与受体蛋白形成的作用键如下:受体蛋白的氨基酸GLY (A: 92)、LYS (A: 111)、GLY (A: 87)、CYS (A: 88)与先导化合物形成氢键, 氨基酸VAR (A: 138)、ILE (A: 153)、ASP (A: 152)与先导化合物形成π烷基键.为获得更好的抗寨卡病毒的抑制剂, 我们可以根据受体蛋白与先导化合物的空间结构与成键关系合理地改造先导化合物化合物^{[35, 36]}.

  图 2

  

  图 2.  先导化合物2a

  Figure 2.  Lead compound 2a

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  图 3

  

  图 3.  受体与先导化合物对接图

  Figure 3.  Docking of receptor protein and leading compound (A) 3D docking, (B) 2D docking

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  受体蛋白5M5B与目标化合物3a的三维对接图见图 4a, 受体蛋白5M5B与目标化合物3a的二维对接图见图 4b.对比图 3b和图 4b的对接结果, 发现结构优化的目标化合物3a在受体蛋白空腔中占据更多的空间, 并且由于链长和官能团的变化, 3a和受体蛋白的结合力也得到加强, 打分更高.由于乙氧基的增加, 3a与受体蛋白多形成了一个氢键VAL (A: 138)和两个π烷基键PHE (A: 139), LYS (A: 111), 使结合更加牢固.我们对先导化合物的结构不断地优化和改造, 最终确定并合成了6个目标化合物, 并进行了初步的体外活性测试, 结果符合预期.

  图 4

  

  图 4.  受体蛋白与结构优化后的目标化合物3a对接图

  Figure 4.  Docking of receptor protein and target compound 3a (A) 3D docking, (B) 2D docking

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  先导化合物2a和优化目标化合物3a与受体蛋白结合的叠合图见图 5. 图 5中红色的为先导化合物2a, 蓝色化合物为经结构优化的化合物3a.由图 5可以看出, 化合物3a较先导化合物2a多一个官能团乙氧基, 且由于乙氧基的增加, 3a与受体蛋白多形成了一个氢键VAL (A: 138)和两个π烷基键PHE (A: 139), LYS (A: 111), 使位点的空腔更加充实.

  图 5

  

  图 5.  先导化合物2a和优化目标化合物3a与受体蛋白结合的叠合图

  Figure 5.  Superimposed figure of lead compound 2a and target compound 3a binding to receptor protein

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  1.   结果与讨论

  1.1   目标化合物的合成

  氯乙酰氯与苯胺经过酰化反应合成中间体A, 再经过取代反应制得目标化合物1a, 产率76%;胡椒环溴化苄与无水哌嗪单取代反应制得中间体B, 再与中间体A发生取代反应得到目标化合物2a~3a, 产率为80%, 76%;中间体B与酰溴反生取代反应制得目标化合物4a~5a, 产率为70%, 71%;中间体B与3-氯-N-(噻吩-2-基甲基)丙酰胺反应得目标化合物6a, 产率为65%.

  1.2   体外活性测试

  化合物1a~6a与对照抗病毒广谱药利巴韦林(图 6)对寨卡病毒的体外抑制活性测试结果见表 1.由表 1的活性数据分析可以看出, 通过对先导化合物的结构改造, 化合物1a和3a对寨卡病毒的抑制活性较2-(4-(苯并[d][1, 3]二氧杂环戊烯-5-甲基)哌嗪-1-基)-N-苯基乙酰胺有所增强, 而化合物4a, 5a, 6a抑制活性有所下降.进一步分析发现, 当链的长度一样时, 3a较先导化合物2a多了取代基乙氧基, 3a抑制寨卡病毒的活性要稍好于2a, 实验结果与计算结果相一致.当链增长, 同时增加甲基时, 1a的体外活性较先导化合物2a也有所增强, 但较3a的活性差.而当链减少, 同时增加硝基(4a)、氯(5a)等官能团时, 体外活性急剧下降.最后当增加链长, 并将苯基换成噻吩时, 活性较4a, 5a有所好转, 但较化合物1a, 2a, 3a的活性差.综上所述, 当链长与先导化合物相同且取代基为甲氧基(1a)或乙氧基(3a)时, 活性较好.当链减少或增加硝基(4a)、氯基(5a)、噻吩(6a)官能团时活性较先导化合物差.值得说明的是化合物3a的体外活性较抗病毒广谱药利巴韦林稍好.

  图 6

  

  图 6.  利巴韦林结构式

  Figure 6.  Structure of ribavirin

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  表 1

  

  表 1  目标化合物1a~6a的结构式及IC₅₀值

  Table 1.  Structures of 1a~6a and their IC₅₀ data

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  化合物	R1	R2	n1	n2	IC50/ (µmol·L－1)
  Ribavirin	—	—	—	—	8.15±0.42
  1a	OCH3	H	0	2	8.98±1.52
  2a	H	H	0	1	10.45±0.46
  3a	H	OCH2CH3	0	1	7.69±0.36
  4a	H	NO2	0	0	41.13±5.23
  5a	Cl	H	0	0	38.25±3.43
  6a		H	1	2	17.51±1.43

  2.   结论

  综上所述, 本研究试图通过计算机药物辅助设计(CADD)和化学合成的方法寻找特异性抗寨卡病毒药物.通过药物筛选软件, 我们可观察到小分子化合物与受体蛋白5M5B的氨基酸GlU (A: 117) ASP (A: 152) VAL (A: 138) PHE (A: 139) LYS (A: 111) GLY (A: 111)特异性结合.在理论指导的基础上, 今后开发抗寨卡病毒特异性药物时, 根据官能团与上述氨基酸相结合情况, 可设计出更具针对性的化合物.在节省人力、物力、财力的基础上, 找到更加有效的抗寨卡病毒药物.

  初步药理显示, 化合物1a (8.98±1.52 µmol·L^－1), 2a (10.45±0.46 µmol·L^－1), 3a (7.69±0.36 µmol·L^－1)抗寨卡病毒的抑制活性与抗病毒广谱药利巴韦林的活性基本持平, 甚至更好, 满足我们的实验预期.结果证明, 我们的设计思路是正确的.

  3.   实验部分

  3.1   仪器与试剂

  ¹H NMR和¹³C NMR谱在Brukes皇冠400 (400 MHz)光谱仪上测量, DMSO-d₆为溶剂, 四甲基硅烷(TMS)为内标; MS谱使用5800矩阵辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(AB SICEX, U.S.A); 红外光谱在Tensor II光谱仪(Brukes, 德国)利用ATR红外采样技术测定, 光谱范围在4000~400 cm^－1.所有溶剂和试剂购买自供应商(阿拉丁), 并直接用于实验.使用硅胶60预涂覆铝板(厚度0.20 mm)从阿拉丁通过UV光(254 nm)的可视化进行薄层色谱(TLC).

  3.2   化合物合成

  3.2.1   中间体A的合成

  将氯代酰氯类化合物(1 mmol)缓慢滴加到苯胺衍生物(1 mmol)中, 在干燥的四氢呋喃溶液中加入三乙胺(5滴), 低温反应2 h.反应完成后, 减压除去溶剂, 在硅胶柱上进行纯化[洗脱剂: V(石油醚):V(乙酸乙酯)＝20:1]得中间体氯代苯酰胺类化合物A, 产率85%.

  3-氯-N-(2-甲氧基苯基)丙酰胺: ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 8.36 (d, J＝8.0 Hz, 1H), 7.94 (s, 1H), 7.04 (t, J＝7.8 Hz, 1H), 6.93 (t, J＝7.7 Hz, 1H), 6.86 (d, J＝8.1 Hz, 1H), 3.88~3.84 (m, 3H), 2.83 (t, J＝6.5 Hz, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 167.55, 147.86, 127.30, 124.07, 121.00, 119.90, 110.02, 55.72, 40.66, 39.96.

  2-氯-N-苯基乙酰胺: ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 8.31 (s, 1H), 7.54 (d, J＝7.9 Hz, 2H), 7.35 (t, J＝7.5 Hz, 2H), 7.17 (t, J＝7.4 Hz, 1H), 4.17 (s, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 163.97, 136.70, 129.17, 125.30, 120.21, 42.95.

  2-氯-N-(4-乙氧基苯基)乙酰胺: ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 8.19 (s, 1H), 7.43 (d, J＝7.9 Hz, 2H), 6.87 (d, J＝7.9 Hz, 2H), 4.17 (s, 2H), 4.01 (q, J＝6.9 Hz, 2H), 1.41 (t, J＝6.9 Hz, 3H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 163.76, 156.45, 129.55, 122.09, 114.82, 63.70, 42.90, 14.85.

  3-氯-N-(噻吩-2-基甲基)丙酰胺: ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 7.21 (d, J＝4.9 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 4.60 (d, J＝5.6 Hz, 2H), 3.78 (t, J＝6.4 Hz, 2H), 2.64 (t, J＝6.4 Hz, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 169.40, 140.58, 126.95, 126.15, 125.32, 40.10, 39.34, 38.40.

  3.2.2   中间体B的合成

  将溴代的胡椒环化合物(1 mmol)与无水哌嗪(1 mmol)在无水四氢呋喃溶液中混合, 加入三乙胺(5滴)回流反应4 h, TLC跟踪反应, 直至反应结束, 经硅胶柱纯化[洗脱剂: V(石油醚):V(乙酸乙酯)＝10:1]得1-(苯并[d][1, 3]二氧杂环戊烯-5-基甲基)哌嗪(B), 产率60%. ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 6.85 (s, 1H), 6.74 (s, 2H), 5.93 (s, 2H), 3.73 (s, 2H), 3.40 (s, 2H), 2.90 (s, 2H), 2.42 (s, 4H); ¹³C NMR (101 MHz, CDCl₃) δ: 147.60, 146.60, 131.71, 122.32, 109.54, 107.85, 100.90, 63.21, 53.54, 45.46.

  3.2.3   化合物1a的合成

  将中间体氯代苯酰胺类化合物A (1 mmol)和三乙胺(5滴)、哌嗪(0.5 mmol)在干燥的四氢呋喃(THF)(30 mL)中混合, 于70 ℃下搅拌回流反应, 薄层色谱(TLC)跟踪分析直到反应完成(通常在4 h内反应完成).反应混合物在减压下蒸出溶剂, 在硅胶柱上纯化[洗脱剂: V(石油醚):V(乙酸乙酯)＝20:1]得到3, 3'-(哌嗪-1, 4-二)双(N-(2-甲氧基苯基)丙酰胺)(1a), 产率为76%.白色固体, m.p. 197.3~198.5 ℃; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 10.27 (s, 2H), 8.48~8.35 (m, 2H), 7.09~7.02 (m, 2H), 6.97 (t, J＝7.7 Hz, 2H), 6.90 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 3.90 (s, 6H), 2.98~2.71 (m, 8H), 2.71~2.46 (m, 8H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 170.56, 148.43, 127.91, 123.64, 121.00, 120.92, 110.04, 55.53, 53.98, 52.44, 33.64; IR v_max: 3321 (NH), 2810 (CH₂), 1668 (C＝O), 1598 (C＝C), 1540 (C＝C), 1489 (CH₂), 1458 (CH₂), 1231 (C—N), 1115 (C—N), 1050 (C—O—C), 1027 (C—O—C) cm^－1; HRMS (ESI+) calcd for C₂₄H₃₃N₄O₂ [M+H]⁺ 441.2497, found 441.2496.

  3.2.4   化合物2a~3a的合成

  氯代苯酰胺类化合物A (1 mmol)与中间体胡椒哌嗪B (1 mmol)在无水四氢呋喃溶液中混合加入三乙胺(5滴)回流反应, TLC跟踪反应, 直至反应完全(大约反应4 h).硅胶柱洗脱纯化[洗脱剂: V(石油醚):V(乙酸乙酯)＝10:1]得纯品2a~3a, 产率分别为80%与76%.

  2-(4-(苯并[d][1, 3]二氧杂环戊烯-5-甲基)哌嗪-1-基)-N-苯基乙酰胺(2a):白色固体, 收率80%. m.p. 113.8~115 ℃; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 9.15 (s, 1H), 7.57 (d, J＝7.6 Hz, 2H), 7.34 (t, J＝7.9 Hz, 2H), 7.11 (t, J＝7.4 Hz, 1H), 6.86 (s, 1H), 6.75 (s, 2H), 5.95 (s, 2H), 3.45 (s, 2H), 3.13 (s, 2H), 2.64 (s, 4H), 2.52 (s, 4H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 168.40, 147.67, 146.66, 137.58, 131.79, 129.02, 124.16, 122.15, 119.39, 109.39, 107.88, 100.92, 62.63, 61.92, 53.51, 53.10; IR v_max: 3321 (NH), 2809 (CH₂), 1673 (C＝O), 1518 (C＝C), 1234 (C—N), 1040 (C—O—C), 932 (C—O—C) cm^－1; HRMS (ESI+) calcd for C₂₀H₂₄N₃O₃ [M+H]⁺ 354.4293, found 354.4291.

  2-(4-(苯并[d][1, 3]二氧杂环戊烯-5-甲基)哌嗪-1-基)-N-(4-乙氧基苯基)乙酰胺(3a):白色固体, 收率76%. m.p. 197.3~198.5 ℃; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 10.27 (s, 2H), 8.48~8.35 (m, 2H), 7.09~7.02 (m, 2H), 6.97 (t, J＝7.7 Hz, 2H), 6.90 (d, J＝8.0 Hz, 2H), 3.90 (s, 6H), 2.98~2.71 (m, 8H), 2.71~2.46 (m, 8H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 170.56, 148.43, 127.91, 123.64, 121.00, 120.92, 110.04, 55.53, 53.98, 52.44, 33.64; IR v_max: 3321 (NH), 2810 (CH₂), 1668 (C＝O), 1598 (C＝C), 1540 (C＝C), 1489 (CH₂), 1458 (CH2), 1231 (C—N), 1115 (C—N), 1050 (C—O—C), 1027 (C—O—C) cm^－1; HRMS (ESI+) calcd for C₂₄H₃₃N₄O₂ [M+H]⁺ 441.2497, found 441.2496.

  3.2.5   化合物4a~5a的合成

  苯酰溴类化合物(1 mmol)缓慢滴加到胡椒哌嗪B (1 mmol)的干燥四氢呋喃溶液中, 加入三乙胺(5滴)反应2 h, 经硅胶柱纯化[洗脱剂: V(石油醚):V(乙酸乙酯)＝10:1]得纯品化合物4a~5a, 产率分别为70%与71%.

  (4-(苯并[d][1, 3]二氧杂环戊烯-5-甲基)哌嗪-1-基)-(4-硝基苯基)甲酮(4a):白色固体, 收率70%. m.p. 138.2~139.5 ℃; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 8.28 (d, J＝8.4 Hz, 2H), 7.58 (d, J＝8.7 Hz, 2H), 6.85 (s, 1H), 6.79~6.69 (m, 2H), 5.96 (s, 2H), 3.81 (s, 2H), 3.46 (s, 2H), 3.37 (s, 2H), 2.54 (s, 2H), 2.39 (s, 2H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 167.85, 148.26, 147.73, 146.83, 141.96, 131.07, 128.06, 123.89, 122.24, 109.32, 107.95, 100.99, 62.48, 52.99, 47.60; IR v_max: 1626 (C＝O), 1516 (NO₂), 1489 (CH2), 1439 (CH₂), 1287 (C—N), 1252 (C—N), 1036 (C—O—C), 939 (C—O—C) cm^－1; HRMS (ESI+) calcd for C₁₉H₂₀N₃O₅ [M+H]⁺ 370.1398, found 370.1396.

  (4-(苯并[d][1, 3]二氧杂环戊烯-5-甲基)哌嗪-1-基)-(2-氯苯基)甲酮(5a):白色固体, 收率71%. m.p. 240~241.2 ℃; ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ: 7.52~7.35 (m, 4H), 7.27 (d, J＝8.1 Hz, 1H), 7.06 (d, J＝13.0, 8.2 Hz, 1H), 6.90 (d, J＝7.9 Hz, 1H), 6.05 (s, 2H), 4.28 (d, J＝19.8 Hz, 2H), 3.83~3.39 (m, 4H), 3.40~2.88 (m, 4H). ¹³C NMR (100 MHz, DMSO-d₆) δ: 166.09, 148.71, 147.91, 134.95, 131.16, 130.56, 129.73, 128.42, 127.90, 125.94, 122.80, 111.73, 108.61, 101.78, 59.28, 50.30, 43.47; IR v_max: 1639 (C＝O), 1494 (C＝C), 1432 (CH₂), 1292 (C—N), 1253 (C—N), 1033 (C—O—C), 958 (C— O—C), 742 (C—Cl) cm^－1; HRMS (ESI+) calcd for C₁₉H₂₀ClN₂O₃ [M+H]⁺ 359.1157, found 359.1155.

  3.2.6   化合物6a的合成

  氯代的噻吩酰胺化合物(1 mmol)与胡椒哌嗪B (1 mmol)在干燥的四氢呋喃的溶液中混合, 加入三乙胺(5滴), 70 ℃回流反应4 h, 经硅胶柱纯化[洗脱剂: V(石油醚):V(乙酸乙酯)＝10:1]得3-(4-(苯并[d][1, 3]二氧杂环戊烯-5-甲基)哌嗪-1-基)-N-(2-噻吩基甲基)丙酰胺(6a), 产率65%, 白色固体, 109.4-112.1 ℃; ¹H NMR (400 MHz, CDCl₃) δ: 9.08 (s, 1H), 7.25~7.21 (m, 1H), 6.97 (d, J＝3.6 Hz, 2H), 6.82 (s, 1H), 6.74 (t, J＝8.7 Hz, 2H), 5.95 (s, 2H), 4.59 (d, J＝5.2 Hz, 2H), 3.34 (s, 3H), 2.64~2.57 (m, 4H), 2.46~2.23 (m, 8H); ¹³C NMR (100 MHz, CDCl₃) δ: 172.09, 147.59, 146.60, 141.27, 131.67, 126.87, 125.67, 124.75, 122.20, 109.44, 107.85, 100.90, 62.58, 53.52, 52.68, 52.19, 37.93, 31.67; IR v_max: 1 3321 (NH), 2801 (CH₂), 1646 (C＝O), 1542 (C＝C), 1241 (C—N), 1035 (C—O—C), 1008 (C—S—C), 931 (C—O—C) cm^－1; HRMS (ESI+) calcd for C₂₀H₃₀N₃O₃S [M+H]⁺ 392.2036, found 392.2034.

  3.3   体外活性测试

  采用CCK8法用待测化合物1a~6a进行了对寨卡病毒(SMGC-1)的体外活性测试, 利用广谱抗病毒药利巴韦林作为阳性对照.待测化合物对寨卡病毒的抑制强度以半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration, IC₅₀)来表示

  辅助材料(Supporting Information)  本文合成的所有最终产物和在本文讨论中涉及到的部分中间体的¹H NMR和¹³C NMR图谱.这些材料可以免费从本刊网站(http://sioc-journal.cn/)上下载.

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  图式 1  目标化合物1a~6a的合成路线

  Scheme 1  Synthetic routes of desired products 1a~6a

  Reagents and conditions: (ⅰ) dried THF, TEA, 0 ℃, 2 h; (ⅱ) dried THF, TEA, reflux, 4 h; (ⅲ) dried THF, TEA, reflux, 4 h; (ⅳ) dried THF, TEA, reflux, 4 h; (ⅴ) dried THF, TEA, 0 ℃, 2 h; (ⅵ) dried THF, TEA, reflux, 4 h

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  图 1  虚拟筛选过程

  Figure 1  Virtual screening process

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  图 2  先导化合物2a

  Figure 2  Lead compound 2a

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  图 3  受体与先导化合物对接图

  Figure 3  Docking of receptor protein and leading compound (A) 3D docking, (B) 2D docking

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  图 4  受体蛋白与结构优化后的目标化合物3a对接图

  Figure 4  Docking of receptor protein and target compound 3a (A) 3D docking, (B) 2D docking

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  图 5  先导化合物2a和优化目标化合物3a与受体蛋白结合的叠合图

  Figure 5  Superimposed figure of lead compound 2a and target compound 3a binding to receptor protein

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  图 6  利巴韦林结构式

  Figure 6  Structure of ribavirin

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  表 1  目标化合物1a~6a的结构式及IC₅₀值

  Table 1.  Structures of 1a~6a and their IC₅₀ data

  化合物	R1	R2	n1	n2	IC50/ (µmol·L－1)
  Ribavirin	—	—	—	—	8.15±0.42
  1a	OCH3	H	0	2	8.98±1.52
  2a	H	H	0	1	10.45±0.46
  3a	H	OCH2CH3	0	1	7.69±0.36
  4a	H	NO2	0	0	41.13±5.23
  5a	Cl	H	0	0	38.25±3.43
  6a		H	1	2	17.51±1.43

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