甾体类化合物是一类生理活性物质，对细胞有较好的渗透亲合能力，对其母体进行结构改造能显著改善底物的药理作用。例如，治疗前列腺癌的甾体药物雌莫司汀磷酸钠(Estramustine phosphate sodium)[1]及醋酸阿比特龙(Abiraterone)[2]就是通过对甾体化合物进行结构改造得到的。笔者课题组以胆甾、豆甾、鹅去氧胆酸、孕烯醇酮、睾酮等甾体分子为原料，通过甾体骨架改造及官能团修饰合成了系列甾体内酰胺[3]、肟[4]、腙[5]、噻唑[6]、苯并咪唑[7]类衍生物，体外抗肿瘤活性测试显示此类化合物对人肺癌细胞(A549)、人甲状腺癌细胞(TPC-1)、人鼻炎癌细胞(CNE-2)具有较好的抑制效果。
近年来的研究显示，在甾体母核上引入含有水杨酸单元的结构片段能显著改善甾体底物的药理作用。Hossain等[8]在孕烯醇酮C3-位羟基上引入水杨酸制得的乙酰水杨酸孕烯醇酮酯(即“抗炎松”)可免受机体代谢，抗炎活性显著增强。Katarina等[9]以天然甾体睾丸酮、去氢睾酮、雌二醇、豆甾醇、谷甾醇等为原料，通过选择性酯化得到12个水杨酸酯类甾体化合物，并测试了其体外抗肿瘤活性，结果表明，该类化合物对人前列腺癌细胞PC-3显示了一定的细胞毒性，其中二氢睾酮水杨酸甲醚酯对人乳腺癌细胞MDA-MB-231的IC50为3.45μmol/L，水杨酸睾酮酯对人胰腺癌细胞PC-3的IC50为16.51μmol/L。
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水杨酸作为一种简单化工原料在药物设计合成中发挥重要的作用。水杨酸衍生物在解热镇痛、抗炎、抗风湿药、心脑血管疾病预防及抗肿瘤方面有很好的效果[10~12]。为进一步探究C3位不同酯链及水杨酸衍生物对甾体药效的影响，本文从孕烯醇酮出发，先在C3位引入不同结构酯链，然后在C20位引入水杨酸甲醚，合成了10个(20R)-孕甾-5-烯-20-(2-甲氧基苯甲酸酯)类化合物4a~4j，并采用MTT法对这些化合物进行了体外抑制肿瘤细胞生长增殖筛选，以探讨孕烯醇酮3-位酯链和20-位基团对肿瘤细胞的抗增殖活性的构效关系。合成路线如图式 1。
Reagents and conditions: (a) (CH3CO)2O or RCOCl/pyridine; (b) CeCl3·7H2O /CH3OH/CH2Cl2/NaBH4; (c) CH2Cl2/pyridine/2-OCH3PhCOCl
Nicolet Avater FT-IR 360傅立叶变换红外光谱仪；Bruker Avance-300型核磁共振谱仪(TMS为内标)；Waters Xevo G2 QT质谱仪；X-4显微熔点测定仪，温度计未经校正。细胞增殖活性评估采用MTT方法，使用MLLTISKAN MK3分光仪测定；FACS CALIBUR流式细胞仪(美国BD公司)。实验药品、试剂均为市售分析纯级，实验中所使用细胞由广西医科大学药学院提供。
以3β-乙酰氧基-孕甾-5-烯-20-酮(2a)的合成为例：将327mg孕烯醇酮置于100mL圆底烧瓶中，加入15mL吡啶，置于40℃油浴锅中搅拌，待原料溶解后滴入200μL乙酰氯，TLC监测无原料点后加入15mL冰水。用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合并有机相，依次用1mol/L稀盐酸、饱和NaHCO3、水萃取，无水Na2SO4干燥，减压旋干溶剂，柱层析纯化(淋洗剂：石油醚/乙酸乙酯体积比5:1)得到白色粉末状固体0.367g，产率99.2%；熔点157~159℃(文献值148~149 ℃[14])；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.63 (s，3H，18-CH3)，1.02(s，3H，19-CH3)，2.03(s，3H，21-CH3)，2.12(s，3H，23-CH3)，2.32(d，J=7.1Hz，2H，4-CH2)，2.53(t，J=8.7Hz，1H，17-CH)，4.61(m，1H，3-CH)，5.37(d，J=4.4Hz，1H，6-CH)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：209.47，170.50，139.65，122.30，73.81，63.65，56.82，49.88(9-C)，43.95，38.77，38.05(10-C)，36.98，36.58，31.80，31.76，31.54，27.74，24.51，22.81，21.39，21.01，19.27，13.19；IR (KBr) ν/cm-1：2943，2891，2846，1729，1701，1470，1432，1357，1233；HREIMS m/z：C23H34NaO3，理论值381.2604，实测值381.2600 [M+Na]+。
其余的9种化合物(2b~2j)的合成，除了用相应的酰氯或酸酐代替乙酰氯之外，均照此方法进行。产物的表征数据如下。
3β-丙酰氧基-孕甾-5-烯-20-酮(2b)：产率97.1%；熔点124~126℃(文献值119~120 ℃[15])；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.65(s，3H，18-CH3)，1.04(s，3H，19-CH3)，1.12(t，3H，24-CH3)，2.14(s，3H，21-CH3)，2.31(q，J=7.4Hz，4H，23-CH2和4-CH2)，2.55(t，J=8.8Hz，1H，17-CH)，4.63(m，1H，3-CH)，5.39(d，J=4.7Hz，1H，6-CH)；13C NMR(76MHz，CDCl3) δ：209.56，173.97，139.74，122.26，73.60，63.68，56.84，49.89，43.98，38.79，38.09，37.01，36.61，31.82，31.76，31.54，27.91，27.57，24.47，22.83，21.03，19.30，13.21，9.17；IR(KBr) ν/cm-1：2945，2896，2868，2851，1736，1699，1450，1382，1360，1185；HREIMS m/z：C24H36NaO3，理论值395.2562，实测值3395.2556 [M+Na]+。
3β-戊酰氧基-孕甾-5-烯-20-酮(2c)：产率90.0%；熔点96~98 ℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.63(s，3H，18-CH3)，0.91(t，J=6.9Hz，3H，26-CH3)，1.02(s，3H，19-CH3)，2.12(s，3H，21-CH3)，2.26(d，J=7.7Hz，2H，4-CH2)，2.32(d，J=8.2Hz，2H，23-CH2)，2.54(t，J=8.6Hz，1H，17-CH)，4.61(m，1H，3-CH)，5.37(d，J=4.4Hz，1H，6-CH)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：209.56，173.34，139.74，122.26，73.53，63.69，56.84，49.89，43.98，38.79，38.17，36.93，36.61，34.42，31.82，31.76，31.54，27.69，27.14，24.51，22.83，22.24，20.96，19.31，13.72，13.21；IR (KBr) ν/cm-1：2945，2903，2876，2846，1729，1699，1357，1263，1175，971，667；HREIMS m/z：C26H40NaO3，理论值423.2875，实测值423.2869 [M+Na]+。
3β-三氯乙酰氧基-孕甾-5-烯-20-酮(2d)：产率85.0%；熔点174~177 ℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.62(s，3H，18-CH3)，1.04(s，3H，19-CH3)，2.11(s，3H，21-CH3)，2.45(d，J=6.7Hz，2H，4-CH2)，2.53(t，J=8.8Hz，1H，17-CH)，4.74(m，1H，3-CH)，5.42(d，J=4.7Hz，1H，6-CH)；13C NMR (76MHz，CDCl3)δ：209.33，161.28，138.63，123.33，90.20，79.59，63.59，56.75，49.78，43.91，38.70，37.24，36.74，36.54，31.75，31.51，31.50，27.04，24.45，22.82，21.03，19.27，13.19；IR (KBr) ν/cm-1：2958，2930，2861，2826，1756，1706，1447，1357，1253；HREIMS m/z：C23H31Cl3NaO3，理论值483.1236，实测值483.1232 [M+Na]+。
3β-苯甲酰氧基-孕甾-5-烯-20-酮(2e)：产率97.8%；熔点195~197℃(文献值192~193℃[16])；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.66(s，3H，18-CH3)，1.09(s，3H，19-CH3)，2.15(s，3H，21-CH3)，4.90(m，1H，3-CH)，5.44(d，J=4.6Hz，1H，6-CH)，7.42~7.56(t，J=7.5Hz，2H，3′, 5′-Ar-H)，7.59(m，1H，4′-Ar-H)，8.05(d，J=1.5Hz，1H，2′, 6′-Ar-H)；13C NMR (76MHz，CDCl3)δ：209.55，166.01，139.68，132.75，130.79，129.53，129.53，128.27，128.27，122.47，74.44，63.69，56.85，49.92，43.99，38.81，38.17，37.05，36.67，31.84，31.80，31.54，27.85，24.49，22.84，21.06，19.36，13.22；IR (KBr) ν/cm-1：3122，1721，1706，1402，1262，1200，1175；HREIMS m/z：C28H6NaO3，理论值4443.2562，实测值443.2502 [M+Na]+。
3β-(4-甲基苯甲酰氧基)-孕甾-5-烯-20-酮(2f)：产率90.1%；熔点194~196 ℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.65 (s，3H，18-CH3)，1.08(s，3H，19-CH3)，2.14(s，3H，21-CH3)，2.42(s，3H，26-CH3)，2.48(d，J=7.8Hz，2H，4-CH2)，2.56(t，J=8.8Hz，1H，17-CH)，4.86(m，1H，3-CH)，5.43(d，J=4.5Hz，1H，6-CH)，7.24(d，J=8.0Hz，2H，3′和5′-Ar-H)，7.94 (d，J=8.0Hz，2H，2′和6′-Ar-H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：209.53，166.07，143.36，139.74，129.56，129.56，128.98，128.98，128.05，122.39，74.20，63.68，56.85，49.91，43.99，38.80，38.20，37.06，36.67，31.84，31.79，31.54，29.69，27.86，24.48，22.84，21.63，21.06，19.37，13.22；IR (KBr) ν/cm-1：2925，2848，1701，1437，1287，1255，1125；HREIMS m/z：C29H38NaO3，理论值457.2719，实测值457.2718 [M+Na]+。
3β-(2-甲基苯甲酰氧基)-孕甾-5-烯-20-酮(2g)：产率92.1%；熔点200~202 ℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.59(s，3H，18-CH3)，1.02(s，3H，19-CH3)，2.08(s，3H，21-CH3)，2.56(s，3H，29-CH3)，4.81(m，1H，3-CH)，5.38(d，J=3.7Hz，1H，6-CH)，7.19(m，2H，4′和5′-Ar-H)，7.33(m，1H，3′-Ar-H)，7.87(d，J=7.9Hz，1H，6′-Ar-H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：209.30，166.96，139.82，139.60，131.75，131.61，130.44，130.15，125.66，122.42，74.23，63.57，56.73，49.83，43.89，38.71，38.22，37.05，36.62，31.76，31.51，27.90，24.46，22.78，21.80，21.03，19.34，13.19；IR (KBr) ν/cm-1：2932，2845，1706，1434，1344，1275，1202，1110；HREIMS m/z：C29H38NaO3，理论值457.2719，实测值457.2713[M+Na]+。
3β-(4-氟苯甲酰氧基)-孕甾-5-烯-20-酮(2h)：产率90.9%；熔点170~174 ℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.64(s，3H，18-CH3)，1.06(s，3H，19-CH3)，2.13(s，3H，21-CH3)，4.84(m，1H，3-CH)，5.41(d，J=4.0Hz，1H，6-CH)，7.10(d，J=7.8Hz，2H，3′和5′-Ar-H)，8.05(d，J=8.0Hz，2H，2′和6′-Ar-H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：209.83，166.65，165.21，164.97，139.69，132.24，132.18，127.11，122.71，115.62，115.48，74.76，63.81，56.96，50.01，44.14，38.92，38.29，37.15，36.79，31.96，31.93，31.74，27.97，24.63，22.95，21.19，19.51，13.38；IR (KBr) ν/cm-1：2932，2898，2880，1716，1506，1275，1225，1113；HREIMS m/z：C28H35FNaO3，理论值461.2468，实测值463.2404[M+Na]+。
3β--(2-呋喃甲酰氧基)-孕甾-5-烯-20-酮(2i)：产率90.0%；熔点183~185 ℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.57(s，3H，18-CH3)，0.98(s，3H，19-CH3)，2.07(s，3H，21-CH3)，4.78(m，1H，3-CH)，5.34(d，J=4.3Hz，1H，6-CH)，6.44(dd，J= 3.4、1.6 Hz，1H，5′-呋喃-H)，7.11(d，J= 3.4Hz，1H，3′-呋喃-H)，7.51(s，1H，5′-呋喃-H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：210.03，158.19，147.03，146.15，139.37，122.55，119.42，112.12，74.52，63.58，56.71，49.77，43.96，38.66，38.03，36.91，36.53，31.73，31.69，31.46，27.72，24.41，22.74，20.97，19.25，13.14；IR (KBr) ν/cm-1：3134，1716，1696，1467，1402，1295，1172，1125；HREIMS m/z：C26H34NaO4，理论值433.2355，实测值433.2349 [M+Na]+。
3β-(2-噻吩甲酰氧基)-孕甾-5-烯-20-酮(2j)：产率89.9%；熔点203~205 ℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.62(s，3H，18-CH3)，1.05(s，3H，19-CH3)，2.11(s，3H，21-CH3)，4.80(m，1H，3-CH)，5.39(d，J=4.6Hz，1H，6-CH)，7.07(m，1H，4′-噻吩-H)，7.52 (dd，J= 5.0、1.2 Hz，1H，5′-噻吩-H)，7.77(dd，J= 3.7、1.3 Hz，1H，3′-噻吩-H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：209.57，161.67，139.54，136.00，134.43，132.15，127.65，122.50，74.75，63.63，56.79，49.86，43.96，38.75，38.12，36.99，36.61，31.80，31.77，31.50，27.80，24.46，21.02，19.33，14.18，13.19；IR (KBr) ν/cm-1：3129，1691，1399，1285，1260；HREIMS m/z：C26H35O3S，理论值427.2307，实测值427.2385 [M+H]+。
以(20R)-3β-乙酰氧基-20-羟基孕甾-5-烯(3a)的合成为例：在100mL的圆底烧瓶中加入285mg化合物2a、310mg CeCl3·7H2O和15mL甲醇，置于40℃水浴中搅拌溶解，15min后分批次加入153mg NaBH4，室温反应至TLC显示原料反应完全，用1mol/L盐酸调节至弱酸性。减压去除CH3OH，加15mL蒸馏水并用乙酸乙酯萃取，有机相依次用H2O、饱和NaCl萃取，无水硫酸钠干燥，旋蒸除去溶剂，柱层析分离(淋洗液：石油醚/乙酸乙酯体积比5:1)得白色固体261mg，产率90.0%；熔点169~170℃，(文献值166~168℃[9])；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.77(s，3H，18-CH3)，1.03(s，3H，19-CH3)，1.13(d，J=6.2Hz，3H，21-CH3)，2.30(s，3H，23-CH3)，2.33(d，J=7.3Hz，2H，4-CH2)，3.73(m，1H，20-CH)，4.62(m，1H，3-CH)，5.38(d，J=4.6Hz，1H，6-CH)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：173.96，139.80，122.39，73.72，70.62，58.44，56.14，50.02，42.26，40.03，38.13，37.00，36.62，31.70，27.90，27.74，23.06，21.40，20.88，19.32，12.43，9.15；IR (KBr) ν/cm-1：3556，2948，2935，2911，2888，2823，1721，1367，1255；HREIMS m/z：C23H36NaO3，理论值383.2562，实测值383.2556 [M+Na]+。
(20R)-3β-丙酰氧基-20-羟基孕甾-5-烯(3b)：产率73.8%；熔点153~155℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.77(s，3H，18-CH3)，1.03(s，3H，19-CH3)，1.13(s，3H，24-CH3)，1.15(s，3H，21-CH3)，2.30(dd，J=14.9、7.4 Hz，4H，23-CH2和4-CH2)，3.73 (dq，J= 11.9、6.0 Hz，1H，20-CH)，4.68~4.55 (m，1H，3-CH)，5.37 (d，J= 4.6Hz，1H，6-CH)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：173.96，139.80，122.39，73.72，70.52，58.44，56.14，50.02，42.26，39.81，38.13，37.00，36.62，31.91，31.70，27.90，27.76，25.64，24.54，23.66，20.88，19.32，12.33，9.16；IR (KBr) ν/cm-1：3476，2963，2932，2893，2866，1731，1696，1462，1270，1208；HREIMS m/z：C24H38NaO3，理论值397.2719，实测值397.2712 [M+Na]+。
(20R)-3β-戊酰氧基-20-羟基孕甾-5-烯(3c)：产率74.7%；熔点145~146℃；1H NMR (300MHz，CDCl3) δ：0.74(s，3H，18-CH3)，0.89(t，J=7.3Hz，3H，26-CH3)，1.00(s，3H，19-CH3)，1.11(d，J=5.8Hz，3H，21-CH3)，2.26(dd，J=15.3、7.6 Hz，4H，23-CH2和4-CH2)，3.74~3.62(m，1H，20-CH)，4.65~4.51(m，1H，3-CH)，5.34(d，J=4.6Hz，1H，6-CH)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：173.27，139.76，122.37，73.63，70.36，58.38，56.13，50.03，42.24，39.74，38.12，37.00，36.59，34.36，31.90，31.68，27.75，27.08，25.64，24.52，23.65，22.20，20.87，19.29，13.70，12.27；IR (KBr) ν/cm-1：3554，2958，2935，2901，2863，1719，1385，1263，1175；HREIMS m/z：C26H42NaO3，理论值425.3032，实测值425.3026 [M+Na]+。
(20R)-3β-三氯乙酰氧基-20-羟基孕甾-5-烯(3d)：产率70.0%；熔点177~179℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.69 (s，3H，18-CH3)，1.06(s，3H，19-CH3)，1.24(s，3H，21-CH3)，2.47(d，J=6.7Hz，2H，4-CH2)，3.78~3.66(m，1H，20-H)，4.84~4.69(m，1H，3-CH)，5.44(d，J=4.7Hz，1H，6-CH)；13C NMR (76MHz，CDCl3)δ：161.33，138.65，123.53，90.22，79.71，70.22，58.36，56.44，49.90，41.58，38.69，37.28，36.75，36.56，31.85，31.46，27.08，25.65，24.17，23.55，20.75，19.29，12.43；IR (KBr) ν/cm-1：3454，2965，2930，2898，1760，1632，1243；HREIMS m/z：C23H33NaO3Cl3，理论值485.1393，实测值485.1387 [M+H]+。
(20R)-3β-苯甲酰氧基-20-羟基孕甾-5-烯(3e)：产率77.2%；熔点184~186℃(文献值185~186 ℃[10])；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.80(s，3H，18-CH3)，1.09(s，3H，19-CH3)，1.16(d，J=6.1Hz，3H，21-CH3)，3.74(dd，J= 9.7、6.1 Hz，1H，20-CH)，5.00~4.77(m，1H，3-CH)，5.43(d，J=4.2Hz，1H，6-CH)，7.43(t，J=7.5Hz，2H，3′和5′-Ar-H)，7.54(d，J=7.3Hz，1H，4′-Ar-H)，8.15~7.97(m，2H，2′和6′-Ar-H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：166.00，139.76，132.70，130.84，129.53，128.25，122.60，74.58，70.51，58.48，56.17，50.08，42.29，39.84，38.23，37.07，36.70，31.96，31.75，27.88，25.67，24.56，23.68，20.93，19.39，12.35；IR (KBr) ν/cm-1：3139，2945，2843，1708，1402，1295，1232，1197，1125；HREIMS m/z：C28H39O3，理论值423.2899，实测值423.2890 [M+H]+。
(20R)-3β-(4-甲基苯甲酰氧基)-20-羟基孕甾-5-烯(3f)：产率89.6%；熔点204~207℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.80 (s，3H，18-CH3)，1.09(s，3H，19-CH3)，1.16(d，J=6.0Hz，3H，21-CH3)，2.42(s，3H，26-CH3)，2.47(d，J=7.9Hz，2H，4-CH2)，3.81~3.69(m，1H，20-CH)，4.93~4.79 (m，1H，3-CH)，5.43(d，J=4.4Hz，1H，6-CH)，7.24(d，J=8.0Hz，2H，2H，3′和5′-Ar-H)，7.94(d，J=8.0Hz，2H，2H，2′和6′-Ar-H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：166.10，143.33，139.82，129.57，128.97，128.08，122.53，74.34，70.57，58.46，56.15，50.04，42.28，39.84，38.25，37.06，36.70，31.95，31.73，27.88，25.66，24.56，23.68，21.64，20.92，19.40，14.20，12.37；IR (KBr) ν/cm-1：3546，2932，2903，2858，1693，1609，1447，1277；HREIMS m/z：C29H40NaO3，理论值459.2875，实测值459.2870[M+Na]+。
(20R)-3β-(2-甲基苯甲酰氧基)-20-羟基孕甾-5-烯(3g)：产率70.7%；熔点183~185℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.71(s，3H，18-CH3)，1.08(s，3H，19-CH3)，1.27(d，J=5.9Hz，3H，21-CH3)，2.50(d，J=7.1Hz，2H，4-CH2)，2.61(s，3H，29-CH3)，3.82~3.70 (m，1H，20-CH)，4.95~4.80(m，1H，3-CH)，5.45(d，J=4.3Hz，1H，6-CH)，7.24(t，J=7.6Hz，2H，4′和5′-Ar-H)，7.45(t，J=7.4Hz，1H，3′-Ar-H)，7.91(d，J=8.1Hz，1H，6′-Ar-H)；13C NMR(76MHz，CDCl3)δ：167.23，141.11，139.74，132.68，131.67，130.44，130.32，125.74，122.65，74.45，70.56，58.31，56.49，50.00，41.60，38.76(4-C)，38.27，37.08，36.67，31.88，31.53，27.95，24.21，23.46，22.07，21.75，20.77，19.38，12.42)；IR(KBr) ν/cm-1：3545，2930，2905，2858，1693，1609，1447，1277，1175；HREIMS m/z：C29H40NaO3，理论值459.2875，实测值459.2870 [M+Na]+。
(20R)-3β-(4-氟苯甲酰氧基)-20-羟基孕甾-5-烯(3h)：产率69.6%；熔点220~222℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.74(s，3H，18-CH3)，1.08(s，3H，19-CH3)，1.15(d，J=6.1Hz，3H，21-CH3)，2.46(d，J=7.9Hz，2H，4-CH2)，3.80~3.65(m，1H，20-CH)，4.92~4.78 (m，1H，3-CH)，5.42(d，J=4.3Hz，1H，6-CH)，7.10(t，J=8.6Hz，2H，3′和5′-Ar-H)，8.05 (dd，J= 8.5、5.6 Hz，2H，2′和6′-Ar-H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：165.04，167.32，163.96，139.63，132.12，131.99127.01，122.69，115.51，115.22，74.75，70.51，58.43，56.13，50.03，42.27，39.80，38.20，37.02，36.67，31.94，31.71，27.85，25.65，24.55，23.69，20.91，19.38，12.34；IR(KBr)ν/cm-1：3436，2935，2908，2888，2855，1716，1596，1499，1270；HREIMS m/z：C28H37FNaO3，理论值463.2624，实测值463.2604 [M+Na]+。
(20R)-3β-(2-呋喃甲酰氧基)-20-羟基孕甾-5-烯(3i)：产率67.1%；熔点203~205℃；1H NMR (300MHz，CDCl3) δ：0.78 (s，3H，18-CH3)，1.07 (s，3H，19-CH3)，1.15(d，J=6.0Hz，3H，21-CH3)，3.74(m，1H，20-CH)，4.85(m，1H，3-CH)，5.51~5.30(m，1H，6-CH)，6.50 (dd，J= 3.5、1.8 Hz，1H，4′-呋喃-H)，7.17 (d，J= 3.4Hz，1H，3′-呋喃-H)，7.57(d，J=1.5Hz，1H，5′-呋喃-H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：158.23，146.06，145.11，139.56，122.74，117.66，111.75(4′-呋喃-H)，74.69，70.54，58.45，56.13，50.03，42.27，39.81，38.15，37.00，36.65，31.93，31.71，27.81，25.64，24.54，23.66，20.90，19.35(19-C)，12.35；IR (KBr) ν/cm-1：3132，2970，2880，1708，1564，1469，1394，1302，1232；HREIMS m/z：C26H36NaO4，理论值435.2511，实测值435.2506 [M+Na]+。
(20R)-3β-(2-噻吩甲酰氧基)-20-羟基孕甾-5-烯(3j)：产率68.4%；熔点235~237℃；1H NMR (600MHz，CDCl3)δ：1.12(s，3H，18-CH3)，1.29(s，3H，19-CH3)，1.55(s，3H，21-CH3)，3.56~3.38(m，1H，20-CH)，4.71(m，J=7.0Hz，1H，3-CH)，5.41(t，J=6.2Hz，1H，6-CH)，6.82 (d，J=1.4Hz，1H，4′-噻吩-H)，7.01(t，J=7.5Hz，1H，5′-噻吩-H)，7.39(d，J=7.5Hz，1H，3′-噻吩-H)；13C NMR(151MHz，CDCl3)δ：161.34，142.46，134.81，133.47，133.05，128.19，122.19，74.75，69.78，54.36，49.34，44.97，44.61，38.56，38.19，36.74，35.65，34.85，31.80，31.25，30.48，29.07，27.84，20.93，20.37，18.21；IR (KBr) ν/cm-1：2942，1731，1467，1452，1437，1372，1242，1083；HREIMS m/z：C26H37O3S，理论值429.2463，实测值429.2426 [M+H]+。
以(20R)-3β-乙酰氧基-孕甾-5-烯-20-(2-甲氧基苯甲酸酯) (4a)的合成为例：称取203mg化合物3a置于100mL反应瓶中，加入15mL吡啶，40℃下搅拌，待原料溶解完后移取150μL水杨甲醚酰氯，使移液枪的枪头没过液面，缓慢加完酰氯后塞上干燥管，搅拌反应至TLC显示原料消失。加入15mL冰水并用乙酸乙酯萃取(15mL×3)，合并有机相，依次用NaHCO3溶液、NaCl溶液、H2O萃取，无水Na2SO4干燥，旋蒸除去乙酸乙酯得粗产品，柱层析分离(淋洗液：石油醚/乙酸乙酯体积比5:1)得白色粉末0.261g，产率93.8%；熔点146~150℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.72(s，3H，18-CH3)，1.00(s，3H，19-CH3)，1.11(m，6H，21-CH3和24-CH3)，3.88 (s，3H，-OCH3)，4.59(m，1H，3-CH)，5.27~5.01(m，1H，20-CH)，5.36(s，1H，6-CH)，6.95(m，2H)，7.43(m，1H)，7.77 (m，1H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：173.86，165.62，159.35，159.08，139.77，133.20，131.39，122.35，121.04，120.60，73.66，72.94，55.85，50.03，42.16，41.71，38.91，38.73，38.13，36.99，36.58，31.73，27.88，26.90，25.54，24.32，20.93，20.74，20.01，19.29，9.17；IR (KBr) ν/cm-1：2970，2935，2908，2860，2825，1723，1594，1579，1494，1399，1292，1250，1135；HREIMS m/z：C31H42NaO5，理论值517.2930，实测值517.2924 [M+Na]+。
(20R)-3β-丙酰氧基-孕甾-5-烯-20-(2-甲氧基苯甲酸酯) (4b)：产率85.7%；熔点100~102 ℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.72(ds，3H，18-CH3)，1.00(s，3H，19-CH3)，1.12(m，6H，21-CH3和24-CH3)，3.88 (s，3H，-OCH3)，4.60 (m，1H，3-CH)，5.25~5.05 (m，1H，20-CH)，5.36(s，1H，6-CH)，6.95 (dd，J= 7.8、4.2 Hz，2H)，7.52~7.32(m，1H)，7.78(m，1H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：173.86，165.62，159.35，159.08，139.77，133.20，131.39，122.38，120.60，120.03，112.03，73.66，73.29，72.94，55.85，55.15，50.07，50.03(9-C)，42.16，38.91，38.73，38.13，36.99，36.61，31.85，31.73，31.55，27.77，26.90，25.54，24.32，20.93，20.74，20.01，19.29，12.37，9.17；IR (KBr) ν/cm-1：2942，2903，2870，2853，1731，1596，1491，1482，1434，1372，1337，1245，1192；HREIMS m/z：C31H44O5，理论值531.3086，实测值531.3082 [M+Na]+。
(20R)-3β-戊酰氧基-孕甾-5-烯-20-(2-甲氧基苯甲酸酯) (4c)：产率89.7%；熔点105~107℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.70(s，3H，18-CH3)，0.88(s，3H，26-CH3)，0.97(d，J=11.6Hz，3H，19-CH3)，1.28(dd，J=25.9、6.0Hz，6H，21-CH3，23-CH2和24-CH2)，3.85(s，3H，-OCH3)，4.68~4.49(m，1H，3-CH)，5.23~5.03(m，1H，20-CH)，5.34(s，1H，6-CH)，6.92(dq，J= 7.3、3.1 Hz，2H)，7.48~7.33 (m，1H)，7.75 (m，1H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：173.12，165.55，165.11，159.32，159.06，139.73，139.69，133.18，131.36，122.36，120.99，73.54，72.88，56.46，56.12，55.76，50.06，42.14，41.68，38.89，38.71，36.99，34.34，31.88，31.83，27.77，27.10，26.88，24.30，24.15，22.21，20.91，20.72，13.72，12.45；IR(KBr) ν/cm-1：3142，2935，2883，2850，2820，1721，1698，1467，1432，1402，1362，1190；HREIMS m/z：C34H48NaO5，理论值559.3399，实测值559.3394 [M+Na]+。
(20R)-3β-三氯乙酰氧基-孕甾-5-烯-20-(2-甲氧基苯甲酸酯) (4d)：产率92.1%；熔点150~152℃；1H NMR(300MHz，CDCl3)δ：0.72(s，3H，18-CH3)，1.01(s，3H，19-CH3)，1.27(d，J=6.0Hz，3H，21-CH3)，3.88(s，3H，-OCH3)，4.75(dd，J= 10.6、4.3 Hz，1H，3-CH)，5.25~5.00 (m，1H，20-CH)，5.42 (d，J= 3.7Hz，1H，6-CH)，6.97(dd，J= 7.9、3.1 Hz，2H)，7.44 (t，J=7.9Hz，1H)，7.77(dd，J=18.4、7.7 Hz，1H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：165.60，165.17，161.25，159.33，138.70，133.19，132.81，131.35，123.47，120.68，112.10，90.26，79.70，73.17，56.46，56.23，56.12，55.87，55.79，55.16，50.02，49.97，42.18，41.73，38.87，38.69，37.30，36.76，36.58，31.91，31.52，27.10，26.91，25.28，24.17，20.96，20.03(19-C)，19.28，12.37；IR (KBr) ν/cm-1：3132，2967，2930，2863，2825，1756，1723，1703，1594，1397，1257；HREIMS m/z：C31H40Cl3O5，理论值597.2941，实测值597.2984 [M+H]+。
(20R)-3β-苯甲酰氧基-孕甾-5-烯-20-(2-甲氧基苯甲酸酯) (4e)：产率82.0%；熔点143~146℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.89(s，3H，18-CH3)，1.29(s，3H，19-CH3)，2.61(s，3H，21-CH3)，3.90(s，3H，-OCH3)，4.32(q，J=6.8Hz，1H，3-CH)，4.41(q，J=7.0Hz，1H，20-CH)，5.41(t，J=6.2Hz，1H，6-CH)，7.03(m，2H)，7.43(t，J=7.3Hz，2H)，7.62~7.47 (m，2H)，8.02 (dd，J= 7.6、2.0 Hz，2H)，8.32(dd，J= 7.4、2.0 Hz，1H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：166.15，164.94，158.36，140.90，133.35，133.11，131.52，130.75，129.53，128.75，122.19，121.93，119.85，112.48，74.26，72.25，56.01，54.00，52.81，49.03，45.18，38.56，37.20，36.88，34.72，34.60，33.07，31.54，27.90，27.84，25.03，19.30，18.60，18.08；IR (KBr) ν/cm-1：3134，2965，2905，2860，2828，1713，1601，1489，1457，1434，1295，1127；HREIMS m/z：C36H44NaO5，理论值579.3086，实测值559.3070 [M+H]+。
(20R)-3β-(4-甲基苯甲酰氧基)-孕甾-5-烯-20-(2-甲氧基苯甲酸酯) (4f)：产率93.4%；熔点180~182℃；1H NMR (300MHz，CDCl3) δ：0.74 (s，3H，18-CH3)，1.04(s，3H，19-CH3)，1.29(d，J=6.1Hz，3H，21-CH3)，2.41(s，3H，-PhCH3)，3.91(s，3H，-OCH3)，4.85 (ddt，J= 16.0、8.3、4.5 Hz，1H，3-CH)，5.15 (dd，J= 9.9、6.1 Hz，1H，20-CH)，5.42 (d，J=3.6Hz，1H，6-CH)，7.08~6.89(m，2H)，7.23(d，J=8.0Hz，2H)，7.56~7.41 (m，1H)，7.84(dd，J=7.9、1.8Hz，1H)，7.94(d，J=8.2Hz，2H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：166.07，165.23，159.39，143.32，139.80，133.24，129.56，128.98，128.09，122.51，120.61，120.07，112.07，74.31，73.00，56.17，55.88，55.18，50.11，42.20，38.95，38.25，37.06，36.66，31.94，31.77，27.90，25.63，24.35，21.63，20.97，20.04，12.40；IR (KBr) ν/cm-1：3129，2970，2942，2885，2848，1718，1596，1489，1402，1285，1237，1180，1165；HREIMS m/z：C37H46NaO5，理论值593.3243，实测值593.3237 [M+Na]+。
(20R)-3β-(2-甲基苯甲酰氧基)-孕甾-5-烯-20-(2-甲氧基苯甲酸酯) (4g)：产率94.0%；熔点189~191℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.75(s，3H，18-CH3)，1.04(s，3H，19-CH3)，1.29(d，J=6.1Hz，3H，21-CH3)，2.60(s，3H，-PhCH3)，3.90(s，3H，-OCH3)，4.85(tt，J= 11.0、4.6 Hz，1H，3-CH)，5.15(m，1H，20-CH)，5.43(d，J=4.1Hz，1H，6-CH)，7.05~6.93 (m，2H)，7.23(t，J=7.0Hz，2H)，7.42~7.32(m，1H)，7.51~7.41 (m，1H)，7.84 (dd，J= 8.0、1.8 Hz，1H)，7.90 (dd，J=8.1、1.4 Hz，1H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：167.11，165.21，159.38，139.79，133.23，131.60，131.42，130.43，125.65，122.56，120.65，120.07，112.09，74.40，72.97，56.17，55.88，55.19，50.13，42.20，38.95，38.30，37.09，36.67，31.78，27.97，26.93，25.64，24.35，21.74，20.98，20.05，19.37，12.41；IR (KBr) ν/cm-1：3132，2975，2868，2835，1731，1511，1489，1454，1397，1295，1252，1130；HREIMS m/z：C37H46NaO5，理论值593.3243，实测值593.3246 [M+Na]+。
(20R)-3β-(4-氟苯甲酰氧基)-孕甾-5-烯-20-(2-甲氧基苯甲酸酯) (4h)：产率96.1%；熔点173~175℃；1H NMR (300MHz，CDCl3) δ：0.72 (s，3H，18-CH3)，1.02(s，2H，19-CH3)，1.27(d，J=6.0Hz，3H，21-CH3)，3.88(s，3H，-OCH3)，4.83(d，J=3.9Hz，1H，3-CH)，5.26~5.01(m，1H，20-CH)，5.52~5.31(m，1H，6-CH)，7.02~6.88(m，2H)，7.08(d，J=8.7Hz，2H)，7.43(t，J=7.9Hz，1H)，7.83(s，1H)，8.15~7.94 (m，2H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：167.30，165.18，163.94，159.35，139.60，133.21，132.09，131.39，127.05，122.64，120.63，120.04，115.49，115.20，112.05，74.68，72.93，56.14，55.83，55.17，50.09，42.17，38.92，38.20，36.62，31.74，27.86，26.90，25.61，24.32，20.95，20.02，19.33，12.37；IR (KBr) ν/cm-1：3147，2967，2937，1726，1596，1504，1397，1275，1250，1135；HREIMS m/z：C36H43NaO5F，理论值597.2992，实测值597.2986 [M+Na]+。
(20R)-3β-(2-呋喃甲酰氧基)-孕甾-5-烯-20-(2-甲氧基苯甲酸酯) (4i)：产率94.5%；熔点172~174℃；1H NMR (300MHz，CDCl3) δ：0.70 (s，3H，18-CH3)，1.02 (s，19-CH3)，1.30(dd，J= 27.6、6.1 Hz，6H，21-CH3)，3.84(s，3H，-OCH3)，4.84(qd，J= 11.5、9.4，4.2 Hz，1H，3-CH)，5.24~5.04 (m，1H，20-CH)，5.45~5.36(m，1H，6-CH)，6.54~6.43(m，1H，4′-呋喃-H)，6.91(dd，J= 8.9、5.0 Hz，2H)，7.16 (t，J=3.5Hz，1H，3′-呋喃-H)，7.55(s，1H)，8.09~7.91(m，2H，5′-呋喃-H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：165.71，163.20，158.17，146.07，145.10，139.53，131.62，123.47，123.26，122.72，117.63，113.58，111.74，74.61，72.88，56.48，56.09，55.37，50.05，42.21，41.70，38.14，36.99，31.55，27.82，26.90，25.50，24.35，20.79，20.05，19.30，12.41；IR (KBr) ν/cm-1：3129，2965，2862，2845，1703，1606，1511，1472，1397，1297，1162；HREIMS m/z：C34H42NaO6，理论值569.2879，实测值569.2874 [M+Na]+。
(20R)-3β-(2-噻吩甲酰氧基)-孕甾-5-烯-20-(2-甲氧基苯甲酸酯) (4j)：产率95.5%；熔点188~190℃；1H NMR (300MHz，CDCl3)δ：0.92(s，3H，18-CH3)，1.28(s，3H，19-CH3)，2.61(s，3H，21-CH3)，3.90(s，3H，-OCH3)，4.40(m，1H，20-CH)，4.63(m，1H，3-CH)，5.41(d，1H，6-CH)，7.12~6.93(m，3H，4′-噻吩-H)，7.49(td，J= 7.5、2.0 Hz，1H，5′-噻吩-H)，7.59(dd，J=7.5、1.5 Hz，1H，3′-噻吩-H)，7.84 (dd，J=7.5、1.5 Hz，1H)，8.32 (dd，J= 7.4、2.0 Hz，1H)；13C NMR (76MHz，CDCl3) δ：164.89，161.53，158.36，142.46，135.42，133.24，131.52，128.19，122.19，119.85，112.48，74.26，72.67，56.01，52.30，49.53，44.97，44.61，38.56，36.74，35.65，34.85，31.80，31.25，30.48，29.39，27.84，20.93，18.60，18.21；IR (KBr) ν/cm-1：3182，2970，2935，2903，2848，1701，1604，1504，1394，1357，1247，1167；HREIMS m/z：C34H42NaO5S，理论值585.2651，实测值585.2698 [M+Na]+。
以顺铂(Cisplatin)为阳性对照，采用MTT法[17, 18]测试化合物对人宫颈癌细胞株(HeLa)、人肺癌细胞(A549)、人甲状腺癌细胞(TPC-1)、人鼻咽癌细胞(CNE-2)及正常细胞人肾上皮细胞(HEK-293T)的体外生长增殖抑制活性。所有细胞分别采用RPMI-1640培养液(加入10%牛血清和0.1g/L青霉素G+0.1g/L硫酸链霉素)在37℃于5% CO2培养箱中培育24h待细胞贴壁，然后于96孔培养板中加入不同浓度的被测试化合物(平行三份)，用等量的DMSO作为阴性对照。培育2h后，细胞采用无菌的磷酸盐缓冲液(PBS)进行洗涤，接着每孔加入190μL RPMI-1640和10μL MTT溶液(5mg/mL)，继续培育4h。弃去上清液，每孔加入200μL DMSO，在振荡器上振荡10min溶解形成的紫色甲瓒晶体沉淀，随后用酶标仪在492nm波长测定OD值，通过式(1)求出样品一定浓度下对细胞的抑制率。
|
$ {\rm 抑制率(\%)＝[(对照OD-空白OD)-(给药OD-空白OD)]/(对照OD-空白OD)×100\%} $ |
(1) |
以抑制率对药物浓度作图，求出每个样品的IC50值。
孕烯醇酮与不同结构的酰氯或酸酐酯化得到化合物2a~2j，产率均大于90%。在CeCl3·7H2O催化下用硼氢化钠可还原C-20位羰基为羟基，继续与甲基水杨酰氯酯化合成了产物4a~4j。2a中20位C＝O经NaBH4还原为羟基的产物中20R构型(即20β型)为主要产物[13]，3a的波谱数据与文献中[14, 15]报道的3β-乙酰氧-20β-羟基孕甾烯数据基本一致，由此确定3a中20-羟基构型为R。其他化合物3b~3j的构型由3a推理得出。20R和20S构型可依据1H NMR中18-CH3的化学位移进行判别，20R构型中18-CH3的δ约为0.74，而20S构型18-CH3的δ约为0.67。
化合物2a的1H NMR谱中δ 4.61 (1H，m)为3位-CH峰，13C NMR谱中δ 170.5处出现酯基—C＝O碳的峰，表明3-位羟基已被酯化。化合物2d的1H NMR谱中，δ 4.74(1H，m)为3位-CH多重峰，较2a向低场发生移动；13C NMR谱中，δ 90.20处为-CCl3的峰。化合物2j的1H NMR谱中，噻吩环上H质子出现在δ 7.77 (dd，3′-噻吩-H)、δ 7.52 (dd，5′-噻吩-H)和δ 7.07 (m，4′-噻吩-H)；13C NMR谱中，δ 136.00、134.43、132.15、127.65分别为噻吩环上C的峰，表明2j的结构为3β-孕烯醇酮噻吩甲酸酯。
化合物3a的1H NMR谱中，δ 3.73 (1H，m)、δ 4.62(1H，m)处分别为20位和3位-OCH的峰，δ 5.39处1H为孕烯6位双键氢的峰；13C NMR谱中，δ 209.47处未出现C＝O碳的信号，在δ 56.48处出现-CHOH的碳峰，说明孕烯醇酮20位羰基已被还原为羟基。
化合物4a的1H NMR谱中出现δ 7.78、7.52~7.32、6.95的吸收峰，对应苯环上的氢，δ 3.88处的单峰为甲氧基的氢峰；在13C NMR谱中，δ 173.86处新增酯基吸收峰、δ 55.15出现的-OCH3峰都证实了水杨酸甲醚通过酯键引入到孕甾烯的20-位。其他孕甾烯水杨酸甲醚酯的结构也可用类似方法得到确证。
采用MTT蛋白染色法，以HeLa、A549、TPC-1、CNE-2及HEK-293T作为被筛选对象，分别对2a~2j、3a~3j、4a~4j进行了体外抑制细胞生长增殖活性测试，结果见表 1所示。
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 |
人宫颈癌细胞 Hela |
人肺癌细胞 A549 |
人甲状腺癌细胞 TPC-1 |
人鼻咽癌细胞 CNE-2 |
人肾上皮细胞 HEK-293T |
| 1 | >100 | >100 | >100 | >100 | >100 |
| 2a | >100 | 12.8 | >100 | >100 | >100 |
| 2b | >100 | 32.6 | >100 | >100 | >100 |
| 2c | >100 | 33.0 | 43.1 | >100 | >100 |
| 2d | 43.5 | 7.9 | 67.3 | 97.6 | 92.6 |
| 2e | 75.3 | 95.1 | >100 | 83.7 | >100 |
| 2f | 44.1 | 87.9 | 87.4 | 47.2 | >100 |
| 2g | 57.0 | 92.1 | 96.0 | 45.3 | >100 |
| 2h | 67.0 | >100 | >100 | 60.5 | >100 |
| 2i | 70.0 | 75.3 | 76.6 | 43.8 | >100 |
| 2j | 64.1 | 79.9 | 92.3 | 55.7 | >100 |
| 3a | 74.0 | 14.5 | 96.4 | 79.5 | >100 |
| 3b | 56.7 | 31.8 | 98.2 | 82.2 | >100 |
| 3c | 59.8 | 28.6 | 34.7 | 78.1 | >100 |
| 3d | 28.9 | 10.3 | 38.7 | 71.4 | >100 |
| 3e | 43.2 | 45.9 | 82.3 | 35.6 | 97.2 |
| 3f | 60.9 | 59.4 | 85.2 | 29.2 | >100 |
| 3g | 53.5 | 50.2 | 71.7 | 22.6 | >100 |
| 3h | 64.6 | 60.5 | 65.3 | 21.6 | 98.6 |
| 3i | 45.4 | 32.6 | 65.8 | 39.1 | >100 |
| 3j | 68.8 | 58.7 | 82.9 | 54.5 | >100 |
| 4a | 64.3 | 29.7 | 83.4 | 70.1 | >100 |
| 4b | 69.2 | 33.8 | 92.0 | 87.3 | 94.1 |
| 4c | 71.6 | 63.0 | 80.2 | 79.9 | 92.4 |
| 4d | 35.9 | 17.8 | 39.0 | 63.5 | >100 |
| 4e | 55.5 | 20.9 | 81.3 | 38.9 | >100 |
| 4f | 46.3 | 27.3 | 55.2 | 43.4 | 98.4 |
| 4g | 58.3 | 21.0 | 76.2 | 32.6 | 92.7 |
| 4h | 42.1 | 37.5 | 68.6 | 33.2 | >100 |
| 4i | 38.9 | 28.0 | 79.7 | 46.0 | >100 |
| 4j | 57.2 | 30.7 | 90.2 | 40.1 | >100 |
| Cisplatin | 10.1 | 5.2 | 10.0 | 12.7 | 11.7 |
从表 1中2a~2j数据可见，孕烯醇酮3-位芳杂环酯链对癌细胞的抑制作用好于直链酯；而直链酯上为吸电子作用的三氯乙酸孕烯醇酮酯2d及其还原产物3d对A549的抑制作用却较明显，IC50值分别达到了7.9和10.3 μmol/L。从3a~3j及4a~4j的数据可看出，多数化合物对肿瘤细胞具有中等程度的抑制作用，且对HEK-293T基本没有毒性；孕烯醇酮20位羰基还原为羟基后对TPC-1、CNE-2的抑制作用有所增强。当C20位引入水杨酸甲醚酯后对A549的抑制能力有所增强，而对其他肿瘤细胞的抑制能力无显著变化。其原因可能为底物与水杨酸甲醚酯化后降低了其在DMSO中的溶解性，不利于提高化合物的细胞活性。
此外，为研究化合物2d对A549细胞抑制增殖的机理，进行了流式细胞仪的凋亡实验。结果显示，化合物2d在40μmol/L浓度下，在12h和24h时A549细胞凋亡比例分别为42.95%和41.52%，凋亡方式主要为晚期凋亡(P3-Q2区)。
(a)12h；(b)24h
以孕烯醇酮为原料，通过还原、酯化等方法合成了10个(20R)-孕甾-5-烯-20-(2-甲氧基苯甲酸酯)类化合物，并分别选用4种肿瘤细胞株和人正常肾上皮细胞对合成物的抗肿瘤活性进行了研究，结果表明孕烯醇酮C3位引入酯链、C20位羰基还原为羟基能提高对肿瘤细胞的抑制作用；化合物2d、3d对A549的抑制作用较明显，IC50值分别达到了7.9和10.3 μmol/L；C20位引入水杨酸甲醚酯对A549抑制能力有所增强。所合成的化合物2a~2j、3a~3j、4a~4j多数对肿瘤细胞具有中等程度的抑制，且对人肾上皮正常细胞HEK-293T没有明显的抑制作用。研究结果对设计合成新的抗肿瘤甾体药物提供了一定的理论参考。
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图式 1 化合物4a~4j的合成路线
Scheme 1 Synthesis route of compounds 4a~4j
Reagents and conditions: (a) (CH3CO)2O or RCOCl/pyridine; (b) CeCl3·7H2O /CH3OH/CH2Cl2/NaBH4; (c) CH2Cl2/pyridine/2-OCH3PhCOCl
图 1 化合物2d(40μmol/L)对A549细胞的诱导凋亡结果
Figure 1 Results of induced apoptosis of A549 cells by compound 2d (40μmol/L)
(a)12h；(b)24h
表 1 孕烯醇酮衍生物2a~4j的体外抗增殖活性(IC50，μmol/L)
Table 1. Antiproliferative activity of compounds 2a~4j in vitro
|
人宫颈癌细胞 Hela |
人肺癌细胞 A549 |
人甲状腺癌细胞 TPC-1 |
人鼻咽癌细胞 CNE-2 |
人肾上皮细胞 HEK-293T |
| 1 | >100 | >100 | >100 | >100 | >100 |
| 2a | >100 | 12.8 | >100 | >100 | >100 |
| 2b | >100 | 32.6 | >100 | >100 | >100 |
| 2c | >100 | 33.0 | 43.1 | >100 | >100 |
| 2d | 43.5 | 7.9 | 67.3 | 97.6 | 92.6 |
| 2e | 75.3 | 95.1 | >100 | 83.7 | >100 |
| 2f | 44.1 | 87.9 | 87.4 | 47.2 | >100 |
| 2g | 57.0 | 92.1 | 96.0 | 45.3 | >100 |
| 2h | 67.0 | >100 | >100 | 60.5 | >100 |
| 2i | 70.0 | 75.3 | 76.6 | 43.8 | >100 |
| 2j | 64.1 | 79.9 | 92.3 | 55.7 | >100 |
| 3a | 74.0 | 14.5 | 96.4 | 79.5 | >100 |
| 3b | 56.7 | 31.8 | 98.2 | 82.2 | >100 |
| 3c | 59.8 | 28.6 | 34.7 | 78.1 | >100 |
| 3d | 28.9 | 10.3 | 38.7 | 71.4 | >100 |
| 3e | 43.2 | 45.9 | 82.3 | 35.6 | 97.2 |
| 3f | 60.9 | 59.4 | 85.2 | 29.2 | >100 |
| 3g | 53.5 | 50.2 | 71.7 | 22.6 | >100 |
| 3h | 64.6 | 60.5 | 65.3 | 21.6 | 98.6 |
| 3i | 45.4 | 32.6 | 65.8 | 39.1 | >100 |
| 3j | 68.8 | 58.7 | 82.9 | 54.5 | >100 |
| 4a | 64.3 | 29.7 | 83.4 | 70.1 | >100 |
| 4b | 69.2 | 33.8 | 92.0 | 87.3 | 94.1 |
| 4c | 71.6 | 63.0 | 80.2 | 79.9 | 92.4 |
| 4d | 35.9 | 17.8 | 39.0 | 63.5 | >100 |
| 4e | 55.5 | 20.9 | 81.3 | 38.9 | >100 |
| 4f | 46.3 | 27.3 | 55.2 | 43.4 | 98.4 |
| 4g | 58.3 | 21.0 | 76.2 | 32.6 | 92.7 |
| 4h | 42.1 | 37.5 | 68.6 | 33.2 | >100 |
| 4i | 38.9 | 28.0 | 79.7 | 46.0 | >100 |
| 4j | 57.2 | 30.7 | 90.2 | 40.1 | >100 |
| Cisplatin | 10.1 | 5.2 | 10.0 | 12.7 | 11.7 |
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