肉桂酸-香豆素酯类似物的合成及抑制酪氨酸酶活性研究

引用本文: 林芷晴, 夏婉铃, 刘仁义, 姜少华, 马志强. 肉桂酸-香豆素酯类似物的合成及抑制酪氨酸酶活性研究[J]. 有机化学, 2020, 40(9): 2980-2987. doi: 10.6023/cjoc202005006 shu

Citation: Lin Zhiqing, Xia Wanling, Liu Renyi, Jiang Shaohua, Ma Zhiqiang. Synthesis of Cinnamic Acid-Coumarin Ester Analogs and Inhibition of Tyrosinase Activity[J]. Chinese Journal of Organic Chemistry, 2020, 40(9): 2980-2987. doi: 10.6023/cjoc202005006 shu

肉桂酸-香豆素酯类似物的合成及抑制酪氨酸酶活性研究

林芷晴 ^a, ,
夏婉铃 ^a, ,
刘仁义 ^a, ,
姜少华 ^{a,
,} ,
马志强 ^{a,b,
,}

a.
五邑大学生物科技与大健康学院广东江门 529000
b.
华南理工大学化学与化工学院广州 510641

通讯作者: 姜少华, wyuchemjsh@126.com; 马志强, 23090330@qq.com

基金项目:

广东省教育厅基金（Nos.2017KSYS010，2017KZDXM084，2019KZDZX2003，2019KZDXM035）资助项目

摘要: 在药物化学中，天然产物结构修饰和骨架杂合策略是拓展骨架生物学活性和寻找高活性先导化合物的重要途径.以取代肉桂酸和羟基香豆素为原料，合成了两个系列的肉桂酸-香豆素酯类似物，并评估了合成化合物对酪氨酸酶的抑制活性.结果表明，肉桂酸-香豆素类似物均有较好的抑制酪氨酸酶活性，其中2-氧代-2H-苯并吡喃-4-基（E）-3-（4-羟基苯基）丙烯酯（C₈）和2-氧代-2H-苯并吡喃-7-基（E）-3-（4-羟基苯基）丙烯酯（D₈）抑制酪氨酸酶的活性最强，IC₅₀分别为（10.7±0.7）和（2.2±0.2）μmol·L^-1，分别是曲酸[IC₅₀：（28.5±1.1）μmol·L^-1]的3倍和13倍.构效关系分析结果显示，3个取代基（F，Cl，OH）的引入可显著提高化合物的酪氨酸酶抑制活性，取代肉桂酸与7-羟基香豆素缩合产物的活性高于其与4-羟基香豆素缩合产物.动力学研究表明，化合物C₈和D₈对酪氨酸酶的抑制是一种可逆、混合型的抑制作用.C₈和D₈的K_I分别为1.07，20.61 μmol·L^-1，K_IS分别为3.72，27.09 μmol·L^-1.最后，采用分子对接模拟了化合物C₈和D₈与酪氨酸酶的结合情况.

关键词:

English

Synthesis of Cinnamic Acid-Coumarin Ester Analogs and Inhibition of Tyrosinase Activity

a.
School of Biotechnology and Grand Health, Wuyi University, Jiangmen, Guangdong 529000
b.
School of Chemistry & Chemical Engineering, South China University of Technology, Guangzhou 510641

Corresponding author: Jiang, Shaohua, E-mail: wyuchemjsh@126.com; Ma, Zhiqiang, E-mail: 23090330@qq.com

Received Date: 04 May 2020
Revised Date: 29 May 2020
Available Online: 01 September 2020
Fund Project:

Project supported by the Department of Education of Guangdong Province (Nos. 2017KSYS010, 2017KZDXM084, 2019KZDZX2003, 19KZDXM035)

Abstract: In medicinal chemistry, the structural modification of natural product and skeleton hybridization strategies is important way to improve the biological activity of template compound and find highly active lead compounds. In this work, two series of cinnamic acid-coumarin ester analogs were synthesized by using cinnamic acid and hydroxycoumarin as raw materials. And the tyrosinase inhibitory activity of the synthesized compounds was evaluated. The results indicated that the cinnamic acid-coumarin analogs had favourable tyrosinase inhibitory activity, especially 2-oxo-2H-benzopyran-4-yl(E)-3-(4-hydroxyphenyl)propenyl ester (C₈), 2-oxo-2H-benzopyran-7-yl(E)-3-(4-hydroxyphenyl)propenyl ester and (D₈) with IC₅₀ of (10.7±0.7) and (2.2±0.2) μmol·L^-1, respectively, which are 3 and 13 times that of kojic acid (IC₅₀ (28.5±1.1) μmol·L^-1). The structure-activity relationship analysis results showed that the introduction of substituents like F, Cl, and OH could efficiently enhance the tyrosinase inhibitory activity, and the inhibitory activity of condensation product of substituted cinnamic acid with 7-hydroxycoumarin was higher than that of substituted cinnamic acid with 4-hydroxycoumarin. Kinetic studies showed that the inhibitions of tyrosinase by compounds C₈ and D₈ are reversible mixed-type inhibitory effects. K_I values of C₈ and D₈ were 1.07 and 20.61 μmol·L^-1, respectively, and K_IS values were 3.72 and 27.09 μmol·L^-1, respectively. Finally, molecular docking was carried out to simulate the docking between compounds C₈ and D₈ with tyrosinase.

Key words:

酪氨酸酶(EC 1.14.18.1)是一种含铜离子的多酚氧化酶, 广泛分布于动植物和微生物中^[1-2].它参与组织黑色素的生物合成过程, 是黑色素的限速酶^[3].在黑色素生成过程中, 酪氨酸酶将L-酪氨酸催化氧化为L-3, 4-二羟基苯丙氨酸(L-DOPA), 并进一步将L-DOPA氧化为邻醌, 最终生成黑色素^[4-5].若黑色素过分积累, 则会引起色素沉着, 并导致各种色斑甚至黑色素瘤^[6-8].酪氨酸酶抑制剂可降低酪氨酸酶的催化速率, 从而预防黑色素的异常沉积.当前, 酪氨酸酶抑制剂可用于预防或治疗黄褐斑、雀斑等色素沉着疾病及美白产品^[9-12].此外, 酪氨酸酶抑制剂还可用作食品保鲜剂, 有效预防食品酶促褐变而导致的变质等问题^[13-15].虽然当前已发现较多的酪氨酸酶抑制剂, 但仅曲酸、苯二酚等有实际的应用, 实践研究还发现曲酸、苯二酚等具有引发细胞毒性、皮肤癌、皮炎等副作用^[16-20].这些都激励我们开发新型、高效、低毒的酪氨酸酶抑制剂.

肉桂酸是肉桂、安息香等天然药用植物的重要活性成分, 肉桂酸及其衍生物不仅具有抗病毒、抗微生物、杀真菌、抗癌和抗氧化等药理作用, 并具有一定的酪氨酸酶抑制作用^[21-24].香豆素是天然产物中非常重要的一类具有苯并吡喃骨架的化合物, 许多研究显示香豆素及其衍生物有着较强的抗炎、抗癌、抗氧化、抗肿瘤及抑制酪氨酸酶等作用^[25-28].

天然产物结构修饰是寻找较高活性先导化合物的重要途径, 骨架杂合策略是拓展其生物学活性, 提升药理作用, 克服耐药性等的关键策略.当前, 很多临床药物和高活性分子都是由结构修饰或者骨架杂合策略获得.因此, 我们在课题组前期研究的基础上^[29-33], 将具有优良活性的天然产物分子肉桂酸和香豆素杂合, 合成了两个系列的肉桂酸-香豆素酯类似物(C₁~C₉和D₁~D₉), 并评估了合成化合物的酪氨酸酶的抑制活性, 以期发现高活性的先导化合物.

1. 结果与讨论

1.1 肉桂酸-香豆素酯类似物的合成

肉桂酸-香豆素酯类似物(C₁~C₉和D₁~D₉)的合成路线如Scheme 1所示.取代肉桂酸在二氯亚砜作用下生成对应的酰氯, 与4-羟基香豆素或7-羟基香豆素反应分别得到对应的目标化合物C₁~C₉和D₁~D₉.文中涉及的化合物均为已知化合物^[34-35], 且化合物结构均经NMR, IR, MS确认.

图式 1

图式 1. 化合物C₁~C₉和D₁~D₉的合成路线

Scheme 1. Synthetic route of compounds C₁~C₉ and D₁~D₉

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1.2 化合物对酪氨酸酶的抑制活性评估

以L-多巴为底物, 测定了化合物C₁~C₉和D₁~D₉对蘑菇酪氨酸酶的抑制活性(表 1).首先筛选了肉桂酸-香豆素酯类似物的终浓度为200 μmol•L^－1时酪氨酸酶的抑制活性, 发现化合物C₁~C₉和D₁~D₉都有一定的酪氨酸酶的抑制作用, 其中C₄, C₅, C₈, D₄, D₅, D₈表现出较明显的抑制酪氨酸酶作用, 抑制作用大于40%, 而其他化合物在200 μmol•L^－1时抑制酪氨酸酶的作用低于40%.接着测定了化合物C₄, C₅, C₈, D₄, D₅, D₈抑制酪氨酸酶的半数抑制浓度(IC₅₀), 同时也测定了母体化合物肉桂酸, 香豆素及阳性对照曲酸的抑制酪氨酸酶活性.结果显示:肉桂酸和香豆素显示出中等强度的酪氨酸酶抑制活性, IC₅₀均高于200 μmol•L^－1; 而酯化产物C₄, C₅, C₈, D₄, D₅, D₈显示出了较强的活性, IC₅₀值(2.2±0.2)~(112.2±3.4) μmol•L^－1, 抑制活性明显高于母体化合物.其中C₈和D₈抑制酪氨酸酶活性显著高于阳性对照曲酸[IC₅₀＝(28.5±1.1) μmol•L^－1].结果提示:取代肉桂酸和香豆素杂合后, 改善了骨架的生物活性, 能够更好地与酪氨酸酶结合, 进而获得更高酪氨酸酶抑制活性的化合物.

表 1

表 1 化合物对酪氨酸酶活性的抑制作用

Table 1. Inhibition of compounds on tyrosinase activity

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Number	R¹	R²	IC₅₀/(µmol•L^－1)
C₁	H	H	＞200^a
C₂	CH₃	H	＞200^a
C₃	OCH₃	H	＞200^a
C₄	F	H	112.2±3.4
C₅	Cl	H	105.5±2.8
C₆	Br	H	＞200^a
C₇	CF₃	H	＞200^a
C₈	OH	H	10.7±0.7
C₉	OH	OCH₃	＞200^a
肉桂酸			201.4±5.3
曲酸			28.5±1.1
D₁	H	H	＞200^a
D₂	CH₃	H	＞200^a
D₃	OCH₃	H	＞200^a
D₄	F	H	78.4±3.2
D₅	Cl	H	76.5±3.1
D₆	Br	H	＞200^a
D₇	CF₃	H	＞200^a
D₈	OH	H	2.2±0.2
D₉	OH	OCH₃	＞200^a
香豆素			＞200^a
^a化合物浓度200 μmol•L^－1时, 酪氨酸酶抑制活性低于40%.

接着对化合物抑制酪氨酸酶活性的构效关系进行分析.比较两个系列化合物C₁~C₉和D₁~D₉的酪氨酸酶抑制活性, 发现7-羟基香豆素杂合产物(D₁~D₉)较4-羟基香豆素杂合产物(C₁~C₉)有更好的酪氨酸酶抑制活性.接着以D₁为母体化合物, 分析D₁~D₉的活性数据, 可得到肉桂酸取代基对化合物抑制酪氨酸酶活性的影响, 结果显示:肉桂酸苯环4位取代基化合物对酪氨酸酶抑制活性有显著影响.化合物D₈ [IC₅₀＝(2.2±0.2) μmol•L^－1]的抑制作用最大, D₅ [IC₅₀＝(76.5±3.1) μmol•L^－1], D₄ [IC₅₀＝(78.4±3.2) μmol•L^－1]的活性次之, 而其他取代基团的IC₅₀值都高于200 μmol•L^－1, 这一结果提示Cl, F, OH基团的引入可有效增强化合物酪氨酸酶抑制活性, 而Br, OCH₃, CF₃, CH₃对活性的增加无益.系列化合物D₁~D₉的构效关系结果与化合物系列C₁~C₉基本一致.化合物C₈和D₈的高活性可能与化合物分子中羟基可与酪氨酸酶间形成更强的作用力有关.因此在后期化合物的设计合成中, 应重点考虑4-羟基肉桂酸杂合7位香豆素骨架的进一步修饰.

1.3 化合物抑制酪氨酸酶的机理

以抑制酪氨酸酶活性最佳的化合物C₈和D₈为代表化合物, 探讨了肉桂酸-香豆素酯类似物抑制酪氨酸酶的机理.酶的抑制类型主要为可逆与不可逆两种, 可以通过不同浓度抑制剂作用下的酶促反应的速率与酶浓度的曲线来确定.如图 1所示, 在不同浓度的化合物C₈和D₈作用下, 酶促反应速率与酶浓度曲线都交于原点, 并且随着抑制剂浓度的增加, 曲线斜率降低.根据酶的抑制类型的定义, 可知化合物C₈和D₈是一种可逆的酪氨酸酶抑制剂^{[10, 26]}.

图 1

图 1. 化合物C₈ (a)和D₈ (b)抑制酪氨酸酶的机理

Figure 1. Inhibition mechanism of mushroom tyrosinase by C₈ (a) and D₈ (b)

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接着采用Lineweaver-Burk双倒数曲线分析了化合物C₈和D₈的抑制剂类型.抑制剂类型主要包含竞争性抑制剂、非竞争性抑制剂、反竞争性抑制剂、混合型抑制剂几种, 可通过不同浓度抑制剂作用下的酶促反应速率与底物浓度的双倒数曲线来确定.如图 2所示, 在不同浓度的化合物C₈和D₈作用下, 酶促反应速率与底物浓度的双倒数曲线在第二象限交于一点.根据抑制剂类型的定义可知, 化合物C₈和D₈抑制酪氨酸酶的抑制类型是混合型抑制^[10].也就是说化合物C₈和D₈不仅可以与游离酪氨酸酶结合, 还可与酪氨酸酶-底物复合物结合.抑制剂与游离酶结合的平衡常数(K_I)可通过不同浓度抑制剂双倒数曲线的斜率与浓度作图得出, 抑制剂与酶-底物复合物结合的平衡常数(K_IS)可通过不同浓度抑制剂双倒数曲线的截距与浓度作图得出参考文献[23]. C₈和D₈的K_I分别为1.07, 20.61 μmol•L^－1, K_IS分别为3.72, 27.09 μmol•L^－1. C₈和D₈的K_IS值高于K_I值, 表明C₈和D₈更倾向与游离酶结合^[19].

图 2

图 2. C₈ (a)和D₈ (b)的双倒数曲线

Figure 2. Lineweaver-Burk plots of C₈ (a) and D₈ (b)

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1.4 分子对接

用Sybyl-2.1.1软件模拟了化合物C₈和D₈与酪氨酸酶结合情况, 酪氨酸酶晶体结构(PDB ID:2Y9X)从PDB数据库获得.首先研究了化合物与酪氨酸酶活性口袋的结合情况, 从图 3a~3b可以看出, C₈和D₈可以较好地与酪氨酸酶活性口袋结合, 其中香豆素部分很好地嵌入在活性口袋中, 而肉桂酸部分则处于口袋的边缘.接着分析了化合物与酪氨酸酶活性口袋处氨基酸残基的结合情况.从图 3c可以看出化合物C₈的羰基氧与酪氨酸酶铜离子间存在极性键作用, C₈羰基与Cu400和Cu401间距分别为0.2264和0.2256 nm; 而且化合物C₈与Asn81, Val283, Phe292, Asn260间形成疏水作用.化合物D₈的羰基氧同样与酪氨酸酶铜离子间形成极性键作用, D₈羰基与Cu400和Cu401间距分别为0.3601和0.2047 nm; 酚羟基氧与Val248形成氢键(间距为0.2751 nm); 此外化合物D₈还与Gly249, Val283, Ser282, Ala286, Met257, Asn260, Phe264, Phe292形成疏水作用(图 3d).相比于化合物C₈, 化合物D₈与酪氨酸酶的Val248形成了氢键, 这可能是两者抑制活性差异的重要原因.

图 3

图 3. C₈和D₈与酪氨酸酶的分子对接

Figure 3. Docking of C₈ and D₈ with tyrosinase

(a, b) The docking of C8 and D8 with the pocket of tyrosinase; (c) the docking of C8 with amino acid residue of pocket of tyrosinase; (d) the docking of D8 with amino acid residue of pocket of tyrosinase

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2. 结论

合成了系列肉桂酸-香豆素酯类似物(C₁~C₉和D₁~D₉), 并筛选了他们的酪氨酸酶抑制活性.肉桂酸和香豆素骨架杂合后, 酪氨酸酶抑制活性明显提高.其中化合物C₈ (IC₅₀ 10.7 µmol•L^－1)和D₈ (IC₅₀ 2.2 μmol• L^－1)的酪氨酸酶抑制活性最强, 分别是曲酸(IC₅₀ 28.5 μmol•L^－1)的3倍和13倍.动力学研究表明, 化合物C₈和D₈是一种可逆混合型的酪氨酸酶抑制剂.肉桂酸和香豆素骨架杂合可开发为潜在的酪氨酸酶抑制剂.

3. 实验部分

3.1 仪器与试剂

Bruker Advance DPX-500 MHz核磁共振仪(以TMS为内标, Chloroform-d或DMSO-d₆为溶剂)测定; 岛津红外光谱仪(KBr压片); Thermo Fisher Scientific(上海) (LCQ^TM) LC-MS质谱仪; 上海仪电物理光学仪器有限公司WRS-2C熔点仪(温度计未经校正).

蘑菇酪氨酸酶(EC 1.14.1.8.1)和L-多巴购自Sigma-Aldrich; 7-羟基香豆素, 4-羟基香豆素, 曲酸购自上海泰坦化学有限公司; 取代肉桂酸购自阿拉丁试剂(上海)有限公司.其他试剂均为市售分析纯.

3.2 肉桂酸-香豆素酯类似物(C₁~C₉和D₁~D₉)的合成

将取代肉桂酸A₁~A₉ (1.0 mmol), SOCl₂ (2.2 mmol), N, N-二甲基甲酰胺(DMF) (1滴)加入二氯甲烷(DCM) (5 mL)中, 反应5 h, 浓缩可得对应的肉桂酰氯B₁~B₉.加入DCM (5 mL)溶解后, 4-羟基香豆素(1.2 mmol)或7-羟基香豆素(1.2 mmol)溶于DCM (5 mL)中, 在冰浴下缓慢滴加至肉桂酰氯溶液, 加入N, N-二异丙基乙胺(3.2 mmol), 薄层色谱(TLC)监测至反应完成.用饱和NaHCO₃淬灭反应, 乙酸乙酯萃取后用饱和食盐水洗涤, 无水硫酸钠干燥后浓缩, 柱层析分离纯化可得到C₁~C₉和D₁~D₉.

2-氧代-2H-苯并吡喃-4-基肉桂酸酯(C₁):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V:V＝5:1:1, 500 mL).白色固体, 产率66.3%. m.p. 154~157 ℃ (Lit.^[32] m.p. 156~157 ℃); ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.98 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 7.71 (dd, J＝7.9, 1.6 Hz, 1H, C21-ArH), 7.66~7.57 (m, 3H, C4, C6, C2-ArH), 7.51~7.44 (m, 3H, C1, C3, C19-ArH), 7.38 (dd, J＝8.4, 1.1 Hz, 1H, C22-ArH), 7.35~7.30 (m, 1H, C20-ArH), 6.68 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 6.60 (s, 1H, CH＝C); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 162.8, 161.6, 158.7, 153.7, 149.4, 133.5, 132.8, 131.6, 129.2, 128.7, 124.4, 122.9, 117.1, 115.7, 115.4, 105.2; IR (KBr) ν: 2924, 1706, 1612, 1385, 1328, 1116, 940, 841, 736 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 315.57 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-4-基(E)-3-(对甲苯基)丙烯酸酯(C₂):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V: V＝5:1:1 (400 mL).白色固体, 产率53.5%. m.p. 138~140 ℃ (Lit.^[32] m.p. 139~140 ℃); ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.95 (d, J＝15.9 Hz, 1H, CH＝CH), 7.72 (dd, J＝8.0, 1.6 Hz, 1H, C19-ArH), 7.59 (td, J＝8.3, 1.6 Hz, 1H, C21-ArH), 7.53 (d, J＝8.0 Hz, 2H, C4, C6-ArH), 7.38 (d, J＝8.3 Hz, 1H, C22-ArH), 7.32 (t, J＝7.6 Hz, 1H, C20-ArH), 7.29~7.25 (m, 2H, C1, C3-ArH), 6.63 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 6.60 (s, 1H, CH＝C), 2.42 (s, 3H, CH₃); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 163.0, 161.6, 158.7, 154.1, 153.7, 149.4, 142.4, 132.7, 130.9, 130.0, 128.7, 124.3, 122.9, 117.1, 115.7, 114.1, 105.2, 21.7; IR (KBr) ν: 2923, 1713, 1616, 1385, 1326, 1127, 938, 846, 810, 759 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 329.07 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-4-基(E)-3-(4-甲氧基苯基)丙烯酸酯(C₃):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V:V＝5:1:1 (350 mL).白色固体, 产率54.5%. m.p. 150~152 ℃ (Lit.^[32] m.p. 149~151 ℃); ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.93 (d, J＝15.8 Hz, 1H, CH＝CH), 7.72 (dd, J＝7.9, 1.6 Hz, 1H, C21-ArH), 7.62~7.57 (m, 3H, C4, C6, C19-ArH), 7.38 (dd, J＝8.4, 1.1 Hz, 1H, C22- ArH), 7.32 (td, J＝7.7, 1.2 Hz, 1H, C20-ArH), 7.00~6.95 (m, 2H, C1, C3-ArH), 6.59 (s, 1H, CH＝C), 6.54 (d, J＝15.8 Hz, 1H, CH＝CH), 3.88 (s, 3H, OCH₃); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 163.1, 162.5, 161.7, 158.8, 153.7, 149.1, 132.7, 130.6, 126.3, 124.3, 123.0, 117.1, 115.8, 114.7, 112.5, 105.1, 55.5; IR (KBr) ν: 2925, 1728, 1609, 1381, 1293, 1112, 946, 837, 765 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 344.98 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-4-基(E)-3-(4-氟苯基)丙烯酸酯(C₄):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V:V＝5:1:1 (400 mL).白色固体, 产率54.5%. m.p. 146~149 ℃ (Lit.^[32] m.p. 146~147 ℃); ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.93 (d, J＝15.9 Hz, 1H, CH＝CH), 7.70 (dd, J＝8.0, 1.6 Hz, 1H, C19-ArH), 7.66~7.57 (m, 3H, C4, C6, C21-ArH), 7.38 (dd, J＝8.4, 1.1 Hz, 1H, C20-ArH), 7.34~7.29 (m, 1H, C22-ArH), 7.18~7.13 (m, 2H, C1, C3-ArH), 6.63~6.58 (m, 2H, CH＝CH, CH＝C); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 165.7, 163.7, 162.7, 161.6, 158.6, 153.7, 148.0, 132.8, 130.8, 130.7, 129.9, 129.8, 124.4, 122.9, 117.2, 116.6, 116.4, 115.6, 115.2, 115.1, 105.3; IR (KBr) ν: 2923, 1711, 1619, 1387, 1331, 1133, 939, 837, 758 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 333.39 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-4-基(E)-3-(4-氯苯基)丙烯酸酯(C₅):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V:V＝5:1:1 (400 mL).白色固体, 产率62.3%. m.p. 184~186 ℃ (Lit.^[32] m.p. 184~185 ℃); ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.92 (d, J＝15.9 Hz, 1H, CH＝CH), 7.70 (dd, J＝7.9, 1.6 Hz, 1H, C21-ArH), 7.62~7.55 (m, 3H, C1, C3, C19-ArH), 7.46~7.42 (m, 2H, C4, C6-ArH), 7.39 (dd, J＝8.4, 1.1 Hz, 1H, C22-ArH), 7.32 (ddd, J＝8.2, 7.3, 1.1 Hz, 1H, C20-ArH), 6.66 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 6.59 (s, 1H, CH＝C); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 162.6, 161.5, 158.6, 153.7, 147.8, 137.7, 132.8, 132.0, 129.8, 129.6, 124.4, 122.8, 117.2, 115.9, 115.6, 105.3; IR (KBr) ν: 2922, 1625, 1382, 1317, 1131, 940, 868, 821, 755 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 348.84 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-4-基(E)-3-(4-溴苯基)丙烯酸酯(C₆):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V:V＝5:1:1 (400 mL).白色固体, 产率61.7%. m.p. 194~197 ℃ (Lit.^[32] m.p. 194~195 ℃); ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.91 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 7.70 (dd, J＝7.9, 1.6 Hz, 1H, C19-ArH), 7.65~7.57 (m, 3H, C4, C6, C21-ArH), 7.54~7.47 (m, 2H, C1, C3-ArH), 7.39 (dd, J＝8.4, 1.1 Hz, 1H, C22-ArH), 7.35~7.28 (m, 1H, C20-ArH), 6.68 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 6.59 (s, 1H, CH＝C); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 162.6, 161.5, 158.6, 153.7, 147.9, 132.8, 132.5, 132.4, 132.3, 130.0, 126.1, 124.4, 122.8, 117.2, 116.0, 115.6, 105.3; IR (KBr) ν: 2922, 1755, 1623, 1380, 1314, 1128, 938, 867, 818, 754 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 393.05 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-4-基(E)-3-(4-三氟甲基苯基)丙烯酸酯(C₇):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V:V＝5:1:1 (350 mL).白色固体, 产率58.9%. m.p. 164~166 ℃ (Lit.^[32] m.p. 165~166 ℃); ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.99 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 7.81~7.67 (m, 5H, C1, C3, C4, C6, C19-ArH), 7.61 (ddd, J＝8.8, 7.3, 1.6 Hz, 1H, C20-ArH), 7.39 (dd, J＝8.4, 1.1 Hz, 1H, C22-ArH), 7.36~7.30 (m, 1H, C21-ArH), 6.77 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 6.60 (s, 1H, CH＝C); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 162.2, 161.4, 158.5, 153.7, 147.3, 136.8, 133.0, 132.9, 132.8, 128.8, 126.2, 126.1, 124.4, 122.8, 118.0, 117.2, 115.5, 105.4; IR (KBr) ν: 2924, 1754, 1626, 1383, 1323, 1117, 941, 834, 755 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 382.78 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-4-基(E)-3-(4-羟基苯基)丙烯酸酯(C₈):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V:V＝5:1:1 (600 mL).白色固体, 产率49.7%. m.p. 170~173 ℃ (Lit.^[32] m.p. 170~171 ℃); ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 10.26 (s, 1H, OH), 7.91 (d, J＝15.9 Hz, 1H, CH＝CH), 7.79 (dd, J＝7.9, 1.6 Hz, 1H, C21-ArH), 7.74~7.67 (m, 3H, C4, C6, C19-ArH), 7.49 (dd, J＝8.3, 1.0 Hz, 1H, C22-ArH), 7.40 (td, J＝7.7, 1.1 Hz, 1H, C20-ArH), 6.87~6.82 (m, 2H, C1, C3-ArH), 6.77 (d, J＝15.9 Hz, 1H, CH＝CH), 6.62 (s, 1H, CH＝C); ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ: 163.8, 161.4, 161.2, 159.3, 153.6, 149.6, 133.7, 131.8, 130.6, 125.3, 125.2, 124.4, 123.7, 123.6, 117.2, 116.9, 116.4, 116.2, 112.0, 105.6; IR (KBr) ν: 3435, 2925, 1737, 1596, 1511, 1384, 1146, 894, 847, 755 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 330.72 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-4-基(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸酯(C₉):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V:V＝5:1:1 (550 mL).淡黄色固体, 产率50.0%. m.p. 177~179 ℃ (Lit.^[32] m.p. 177~178 ℃); ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.86 (s, 1H, OH), 7.90 (d, J＝15.8 Hz, 1H, CH＝CH), 7.80 (dd, J＝8.0, 1.6 Hz, 1H, C19-ArH), 7.72 (ddd, J＝8.7, 7.3, 1.6 Hz, 1H, C21-ArH), 7.52~7.46 (m, 2H, C4, C22-ArH), 7.45~7.40 (m, 1H, C20-ArH), 7.31~7.24 (m, 1H, C6-ArH), 6.88~6.82 (m, 2H, CH＝CH, C1-ArH), 6.63 (s, 1H, CH＝C), 3.85 (s, 3H, OCH₃); ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ: 163.8, 161.2, 159.3, 153.6, 151.0, 149.9, 148.6, 133.7, 125.7, 125.2, 125.0, 123.7, 117.2, 116.1, 115.9, 112.3, 112.2, 105.6, 56.3; IR (KBr) ν: 3431, 2925, 1723, 1621, 1385, 1274, 1117, 944, 851, 759 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 359.46 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-7-基肉桂酸酯(D₁):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V:V＝5:1:1 (350 mL).白色固体, 产率65.4%. m.p. 153~154 ℃ (Lit.^[32] m.p. 152~154 ℃); ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.91 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 7.71 (d, J＝9.5 Hz, 1H, CH＝C), 7.63~7.57 (m, 2H, C1, C3-ArH), 7.52 (d, J＝8.4 Hz, 1H, C17-ArH), 7.48~7.41 (m, 3H, C16, C4, C6-ArH), 7.21 (d, J＝2.2 Hz, 1H, C13-ArH), 7.15 (dd, J＝8.4, 2.2 Hz, 1H, C2-ArH), 6.63 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 6.41 (d, J＝9.6 Hz, 1H, C20-ArH); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 164.7, 160.4, 154.8, 153.4, 147.8, 142.9, 133.9, 131.1, 129.1, 128.6, 128.5, 118.5, 116.7, 116.4, 116.1, 110.5; IR (KBr) ν: 2925, 1725, 1623, 1410, 1312, 986, 864, 757, 692 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 314.96 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-7-基(E)-3-(对甲苯基)丙烯酸酯(D₂):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V: V＝5:1:1 (400 mL).白色固体, 产率53.7%. m.p. 174~179 ℃ (Lit.^[32] m.p. 174~176 ℃); ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.88 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 7.71 (d, J＝9.5 Hz, 1H, CH＝C), 7.51 (t, J＝8.0 Hz, 3H, C4, C6, C16-ArH), 7.28~7.22 (m, 3H, C1, C3, C13-ArH), 7.21 (d, J＝2.2 Hz, 1H, C17-ArH), 7.15 (dd, J＝8.4, 2.2 Hz, 1H, CH＝CH), 6.41 (d, J＝9.5 Hz, 1H, C20-ArH), 2.41 (s, 3H, CH₃); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 164.9, 160.5, 154.8, 153.5, 147.8, 143.0, 141.7, 131.2, 129.9, 128.6, 128.5, 118.6, 116.6, 116.0, 115.3, 110.5, 21.6; IR (KBr) ν: 2923, 1723, 1619, 1404, 1260, 1129, 987, 811, 747 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 328.97 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-7-基(E)-3-(4-甲氧基苯基)丙烯酸酯(D₃):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V:V＝5:1:1 (350 mL).白色固体, 产率53.7%. m.p. 196~200 ℃ (Lit.^[32] m.p. 196~198 ℃); ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.86 (d, J＝15.9 Hz, 1H, CH＝CH), 7.70 (d, J＝9.5 Hz, 1H, CH＝C), 7.58~7.49 (m, 3H, C4, C6, C16-ArH), 7.22~7.12 (m, 2H, C13, C17-ArH), 6.95 (d, J＝2.0 Hz, 2H, C1-ArH), 6.94 (d, J＝2.1 Hz, 1H, C3-ArH), 6.49 (d, J＝15.9 Hz, 1H, CH＝CH), 6.40 (d, J＝9.5 Hz, 1H, C20-ArH), 3.86 (s, 3H, OCH₃); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 165.0, 162.1, 160.5, 154.8, 153.6, 147.4, 143.0, 130.3, 128.6, 126.7, 118.6, 116.6, 116.0, 114.6, 113.7, 110.6, 55.5; IR (KBr) ν: 2925, 1736, 1610, 1417, 1260, 1136, 995, 887, 825 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 345.10 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-7-基(E)-3-(4-氟苯基)丙烯酸酯(D₄):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V: V＝5:1:1 (350 mL).白色固体, 产率63.8%. m.p. 207~210 ℃ (Lit.^[32] m.p. 208~210 ℃); ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.87 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 7.71 (d, J＝9.6 Hz, 1H, CH＝C), 7.64~7.57 (m, 2H, C4, C6-ArH), 7.52 (d, J＝8.4 Hz, 1H, C16-ArH), 7.21 (d, J＝2.2 Hz, 1H, C17-ArH), 7.13 (td, J＝8.4, 2.0 Hz, 3H, C1, C3, C13-ArH), 6.56 (d, J＝15.9 Hz, 1H, CH＝CH), 6.41 (d, J＝9.6 Hz, 1H, C20-ArH); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 164.6, 160.4, 154.8, 153.4, 146.4, 142.9, 130.5, 130.4, 128.6, 118.5, 116.4, 116.3, 116.2, 116.2, 116.1, 110.5; IR (KBr) ν: 2924, 1734, 1615, 1411, 1235, 1137, 993, 835 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 333.11 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-7-基(E)-3-(4-氯苯基)丙烯酸酯(D5):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V: V＝5:1:1 (400 mL).白色固体, 产率51.7%. m.p. 200~203 ℃ (Lit.^[32] m.p. 201~203 ℃); ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.85 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 7.71 (d, J＝9.5 Hz, 1H, CH＝C), 7.57~7.50 (m, 3H, C4, C6, C16-ArH), 7.45~7.38 (m, 2H, C1, C3-ArH), 7.20 (d, J＝2.2 Hz, 1H, C13-ArH), 7.14 (dd, J＝8.5, 2.2 Hz, 1H, C17-ArH), 6.60 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 6.41 (d, J＝9.5 Hz, 1H, C20-ArH); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 164.5, 160.4, 154.8, 153.3, 146.2, 142.9, 137.1, 132.4, 129.6, 129.4, 128.6, 118.4, 117.0, 116.7, 116.1, 110.5; IR (KBr) ν: 2924, 1726, 1620, 1406, 1273, 1125, 817 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 349.31 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-7-基(E)-3-(4-溴苯基)丙烯酸酯(D₆):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V: V＝5:1:1 (400 mL).白色固体, 产率64.6%. m.p. 216~218 ℃ (Lit.^[32] m.p. 217~218 ℃); ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.83 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 7.71 (d, J＝9.6 Hz, 1H, CH＝C), 7.60~7.55 (m, 2H, C4, C6-ArH), 7.52 (d, J＝8.4 Hz, 1H, C16-ArH), 7.47 (d, J＝2.1 Hz, 1H, C1-ArH), 7.46 (d, J＝1.9 Hz, 1H, C3-ArH), 7.20 (d, J＝2.1 Hz, 1H, C13-ArH), 7.14 (dd, J＝8.4, 2.2 Hz, 1H, C17-ArH), 6.62 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 6.41 (d, J＝9.5 Hz, 1H, C20-ArH); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 164.4, 160.4, 154.8, 153.3, 146.3, 142.9, 132.8, 132.4, 129.8, 128.6, 125.5, 118.4, 117.1, 116.7, 116.1, 110.5; IR (KBr) ν: 2924, 1723, 1615, 1404, 1268, 1122, 986, 847, 812, 600 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 393.33 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-7-基(E)-3-(4-三氟甲基苯基)丙烯酸酯(D₇):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V:V＝5:1:1 (400 mL).白色固体, 产率45.3%. m.p. 178~181 ℃ (Lit.^[32] m.p. 178~180 ℃); ¹H NMR (500 MHz, CDCl₃) δ: 7.91 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 7.71 (d, J＝10.9 Hz, 5H, CH＝C, C1, C4, C3, C6-ArH), 7.53 (d, J＝8.4 Hz, 1H, C16-ArH), 7.21 (d, J＝2.2 Hz, 1H, C13-ArH), 7.15 (dd, J＝8.4, 2.2 Hz, 1H, C17-ArH), 6.71 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 6.42 (d, J＝9.6 Hz, 1H, C20-ArH); ¹³C NMR (126 MHz, CDCl₃) δ: 164.2, 160.4, 154.8, 153.2, 145.7, 142.9, 137.2, 128.7, 128.6, 126.1, 126.1, 126.1, 126.0, 119.1, 118.4, 116.8, 116.2, 110.5; IR (KBr) ν: 2924, 1727, 1619, 1411, 1328, 1270, 1198, 1068, 985, 864, 830 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 382.73 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-7-基(E)-3-(4-羟基苯基)丙烯酸酯(D₈):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V:V＝5:1:1 (500 mL).白色固体, 产率43.0%. m.p. 242~244 ℃ (Lit.^[32] m.p. 242~244 ℃); ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 10.17 (s, 1H, OH), 8.10 (dd, J＝9.6, 0.7 Hz, 1H, CH＝CH), 7.84~7.77 (m, 2H, CH＝C, C1-ArH), 7.70~7.65 (m, 2H, C4, C6-ArH), 7.36 (d, J＝2.3 Hz, 1H, C16-ArH), 7.23 (dd, J＝8.4, 2.2 Hz, 1H, C17-ArH), 6.88~6.82 (m, 2H, C3, C13-ArH), 6.66 (d, J＝16.0 Hz, 1H, CH＝CH), 6.49 (d, J＝9.6 Hz, 1H, C20-ArH); ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ: 165.4, 161.0, 160.3, 154.6, 153.6, 148.0, 144.4, 131.4, 129.8, 125.4, 119.2, 117.1, 116.4, 116.0, 113.0, 110.7; IR (KBr) ν: 3424, 2924, 1736, 1598, 1389, 1128, 817 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 330.98 ([M+Na]⁺).

2-氧代-2H-苯并吡喃-7-基(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸酯(D₉):淋洗剂:石油醚/乙酸乙酯/二氯甲烷(V:V:V＝5:1:1 (450 mL).白色固体, 产率59.3%. m.p. 214~216 ℃ (Lit.^[32] m.p. 213~215 ℃); ¹H NMR (500 MHz, DMSO-d₆) δ: 9.77 (s, 1H, OH), 8.11 (d, J＝0.7 Hz, 1H, CH＝CH), 7.81 (d, J＝5.1 Hz, 1H, CH＝C), 7.79 (d, J＝2.3 Hz, 1H, C1-ArH), 7.45 (d, J＝2.0 Hz, 1H, C4-ArH), 7.36 (d, J＝2.2 Hz, 1H, C17-ArH), 7.24 (dd, J＝8.4, 2.2 Hz, 2H, C6, C13-ArH), 6.84 (d, J＝8.2 Hz, 1H, C16-ArH), 6.75 (d, J＝15.9 Hz, 1H, CH＝CH), 6.49 (d, J＝9.6 Hz, 1H, C20-ArH), 3.84 (s, 3H, OCH₃); ¹³C NMR (126 MHz, DMSO) δ: 165.4, 160.3, 154.6, 153.6, 150.5, 148.5, 148.3, 144.4, 129.8, 125.8, 124.4, 119.2, 117.1, 116.1, 116.0, 113.3, 112.0, 110.6, 56.2; IR (KBr) ν: 3433, 2924, 1709, 1607, 1420, 1232, 1128, 983, 849 cm^－1; MS (70 eV) m/z: 359.65 ([M+Na]⁺).

3.3 抑制酪氨酸酶活性实验

参考Ielo等^[33]的研究方法并稍作修改, 合成的衍生物、香豆素、肉桂酸及曲酸均用DMSO溶解, 并稀释成不同浓度的化合物.将130 μL磷酸缓冲溶液(50 mmol• L^－1, pH＝6.8), 10 μL酪氨酸酶溶液(终浓度33.3 U/mL)和10 μL待测化合物混匀后, 加入50 μL L-Dopa(终浓度0.5 mmol•L^－1)混匀, 于490 nm波长下测定OD值的变化率.抑制率(%)＝[(OD₁－OD₂)/OD₁]×100%, 其中OD₁为空白OD值的变化率, OD₂为测试化合物OD值的变化率.

3.4 酶抑制动力学研究

测定方法与上述测定化合物的酪氨酸酶抑制活性的方法类似.

酶抑制机理: L-Dopa的终浓度为0.5 mmol/L, 酪氨酸酶的终浓度为25.0, 33.3, 41.6, 50.0 U/mL时, 测定不同浓度化合物C₈和D₈在490 nm波长下OD值的变化率.以不同浓度化合物作用下OD值的变化率与酶浓度作图^[10].

酶抑制类型: L-多巴的终浓度为0.5, 0.75, 1, 1.25 mmol•L^－1, 酪氨酸酶的终浓度为33.3 U/mL下, 测定不同浓度化合物C₈和D₈在490 nm波长下测定OD值的变化率.以OD值的变化率与多巴浓度用双倒数曲线作图^[32].

3.5 分子对接实验

用Sybyl-2.1.1软件模拟化合物C₈和D₈与酪氨酸酶的结合.化合物C₈和D₈加氢后, 加电荷, 使用MM2程序进行能量最小化运算.酪氨酸酶的晶体结构(PDB ID: 2Y9X)进行去水, 加氢, 修复侧链酰胺, 使用酪氨酸酶2Y9X自带配体的活性口袋, 默认模式下与能量最小化的化合物C₈和D₈进行对接.

1. [1]
  徐焱, 雷鹏, 凌云, 王圣文, 杨新玲, 有机化学, 2014, 34, 1118. doi: 10.6023/cjoc201401034Xu, Y.; Lei, P.; Ling, Y.; Wang, S. W.; Yang X. L. Chin. J. Org. Chem. 2014, 34, 1118(in Chinese). doi: 10.6023/cjoc201401034
2. [2]
  Wu, L. D.; Rathi, B.; Chen, Y.; Wu, X. H.; Liu, H.; Li, J. C.; Ming, A. J.; Han, G. RSC Adv. 2018, 69, 39529.
3. [3]
  Rainer, B.; Revoltella, S.; Mayr, F.; Moesslacher, J.; Scalfari, V.; Kohl, R.; Waltenberger, B.; Pagitz, K.; Siewert, B.; Schwaiger, S.; Stuppner, H. Eur. J. Med. Chem. 2019, 184, 111738. doi: 10.1016/j.ejmech.2019.111738
4. [4]
  Rosada, B.; Bekier, A.; Cytarska, J.; Plazinski, W.; Zavyalova, O.; Sikora, A.; Dzitko, K.; Laczkowski, K. Z. Eur. J. Med. Chem. 2019, 184, 111765. doi: 10.1016/j.ejmech.2019.111765
5. [5]
  Chen, J. M.; Li, Q. L.; Ye, Y. L.; Huang, Z. Y.; Ruan, Z. P.; Jin, N. Spectrochim. Acta. A 2020, 226, 117642. doi: 10.1016/j.saa.2019.117642
6. [6]
  Lee, B.; Moon, K. M.; Lim, J. S.; Park, Y.; Kim, D. H.; Son, S.; Jeong, H. O.; Kim, D. H.; Lee, E. K.; Chung, K. W.; An, H. J.; Chun, P.; Seo, A. Y.; Yang, J. H.; Lee, B. S.; Ma, J. Y.; Cho, W. K.; Moon, H. R.; Chung, H. Y. Oncotarget 2017, 8, 91481. doi: 10.18632/oncotarget.20690
7. [7]
  Hwang, Y. S.; Oh, S. W.; Park, S. H.; Lee, J.; Yoo, J. A.; Kwon, K.; Park, S. J.; Kim, J.; Yu, E.; Cho, J. Y.; Lee, J. Oxid. Med. Cell. Longevity 2019, 9827519.
8. [8]
  Raza, H.; Abbasi, M. A.; Aziz-ur-Rehman.; Siddiqui, S. Z.; Hassan, M.; Abbas, Q.; Hong, H.; Shah, S. A. A.; Shahid, M.; Seo, S. Y. Bioorg. Chem. 2020, 94, 103445. doi: 10.1016/j.bioorg.2019.103445
9. [9]
  Cai, P. G.; Xiong, Y.; Yao, Y.; Chen, W.; Dong, X. W. New J. Chem. 2019, 43, 14102. doi: 10.1039/C9NJ02360G
10. [10]
  Pillaiyar, T.; Manickam, M.; Namasivayam, V. J. Enzyme Inhib. Med. Chem. 2017, 32, 403. doi: 10.1080/14756366.2016.1256882
11. [11]
  Ho, Y. S.; Wu, J. Y.; Chang, C. Y. Antioxidants 2019, 8, 474. doi: 10.3390/antiox8100474
12. [12]
  Arrowitz, C.; Schoelermann, A. M.; Mann, T.; Jiang, L. I.; Weber, T.; Kolbe, L. J. Invest. Dermatol. 2019, 139, 1691. doi: 10.1016/j.jid.2019.02.013
13. [13]
  Paudel, P.; Seong, S. H.; Wagle, A.; Min, B. S.; Jung, H. A.; Choi, J. S. Food Chem. 2020, 309, 125739. doi: 10.1016/j.foodchem.2019.125739
14. [14]
  Zhang, L.; Zhao, X.; Tao, G. J.; Chen, J.; Zheng, Z. P. Food Chem. 2017, 223, 40. doi: 10.1016/j.foodchem.2016.12.017
15. [15]
  Micheloni, O. B.; Farroni, A. E.; Garcia, P.; Furlan, R. L. E. Food Chem. 2018, 269, 638. doi: 10.1016/j.foodchem.2018.07.025
16. [16]
  Wang, R.; Chai, W. M.; Yang, Q.; Wei, M. K.; Peng, Y. Y. Bioorg. Med. Chem. 2016, 24, 4620. doi: 10.1016/j.bmc.2016.07.068
17. [17]
  Bhosle, M. R.; Khillare, L. D.; Mali, J. R.; Sarkate, A. P.; Lokwani, D. K.; Tiwari, S. V. New J. Chem. 2018, 42, 18621. doi: 10.1039/C8NJ04622K
18. [18]
  Dinparast, L.; Hemmati, S.; Zengin, G.; Alizadeh, A. A.; Bahadori, M. B.; Kafil, H. S.; Dastmalchi, S. ChemistrySelect 2019, 4, 9211. doi: 10.1002/slct.201901921
19. [19]
  Santi, M. D.; Bouzidi, C.; Gorod, N. S.; Puiatti, M.; Michel, S.; Grougnet, R.; Ortega, M. G. Bioorg. Chem. 2019, 82, 241. doi: 10.1016/j.bioorg.2018.10.034
20. [20]
  Saeedi, M.; Eslamifar, M.; Khezri, K. Biomed. Pharmacother. 2019, 110, 582. doi: 10.1016/j.biopha.2018.12.006
21. [21]
  Taofiq, O.; Heleno, S. A.; Calhelha, R. C.; Fernandes, I. P.; Alves, M. J.; Barros, L.; Gonzalez-Paramas, A. M.; Ferreira, I.; Barreiro, M. F. Microchem. J. 2019, 147, 469. doi: 10.1016/j.microc.2019.03.059
22. [22]
  Tavares-da-Silva, E. J.; Varela, C. L.; Pires, A. S.; Encarnacao, J. C.; Abrantes, A. M.; Botelho, M. F.; Carvalho, R. A.; Proenca, C.; Freitas, M.; Fernandes, E.; Roleira, F. M. F. Bioorg. Med. Chem. 2016, 24, 3556. doi: 10.1016/j.bmc.2016.05.065
23. [23]
  Zhao, Z. F.; Liu, G. X.; Meng, Y. F.; Tian, J. L.; Chen, X. F.; Shen, M. L.; Li, Y. X.; Li, B. Y.; Gao, C.; Wu, S. P.; Li, C. Q.; He, X. R.; Jiang, R.; Qian, M. C.; Zheng, X. H. Bioorg. Chem. 2019, 93, 103316. doi: 10.1016/j.bioorg.2019.103316
24. [24]
  张学博, 马航宇, 孙腾达, 雷鹏, 杨新玲, 张晓鸣, 凌云, 有机化学, 2019, 39, 2965. doi: 10.6023/cjoc201903031Zhang, X. B.; Ma, H. Y.; Sun, T. D.; Lei, P.; Yang, X. L.; Zhang, X. M.; Ling, Y. Chin. J. Org. Chem. 2019, 39, 2965(in Chinese). doi: 10.6023/cjoc201903031
25. [25]
  Hussain, M. I.; Syed, Q. A.; Khattak, M. N. K.; Hafez, B.; Reigosa, M. J.; El-Keblawy, A. Biologia 2019, 74, 863. doi: 10.2478/s11756-019-00242-x
26. [26]
  Kurt, Z. B.; Sonmez, F.; Ozturk, D.; Akdemir, A; Angeli, A; Supuran, C. T. Eur. J. Med. Chem. 2019, 183, 111702. doi: 10.1016/j.ejmech.2019.111702
27. [27]
  Menezes, J. C. J. M. D. S.; Diederich, M. F. Eur. J. Med. Chem. 2019, 182, 111637. doi: 10.1016/j.ejmech.2019.111637
28. [28]
  乔丽丽, 魏艳, 郝双红, 有机化学, 2018, 38, 509. doi: 10.6023/cjoc201708004Qiao, L. L.; Wei, Y.; Hao, S. H. Chin. J. Org. Chem. 2018, 38, 509(in Chinese). doi: 10.6023/cjoc201708004
29. [29]
  徐学涛, 陈洁, 林芷晴, 李冬利, 张焜, 盛钊君, 王少华, 朱顺, Abdullah M. Asiri, 有机化学, 2019, 39, 2958. doi: 10.6023/cjoc201903020Xu, X. T.; Chen, J.; Lin, Z. Q.; Li, D. L.; Zhang, K.; Sheng, Z. J.; Wang, S. H.; Zhu, S.; Asiri, A. Chin. J. Org. Chem. 2019, 39, 2958(in Chinese). doi: 10.6023/cjoc201903020
30. [30]
  王少华, 张帮红, 陈洁, 郑莹莹, 冯娜, 马爱军, 徐学涛, Abdullah M. Asiri, 有机化学, 2020, 40, 15. doi: 10.6023/cjoc201906007Wang, S. H.; Zhang, B. H.; Chen, J.; Zheng, Y. Y.; Feng, N.; Ma, A. J.; Xu, X. T.; Asiri, A. Chin. J. Org. Chem. 2020, 40, 15(in Chinese). doi: 10.6023/cjoc201906007
31. [31]
  徐力, 王少华, 李辉, 有机化学, 2015, 35, 1559. doi: 10.6023/cjoc201501022Xu, L.; Wang, S. H.; Li, H. Chin. J. Org. Chem. 2015, 35, 1559(in Chinese). doi: 10.6023/cjoc201501022
32. [32]
  Xu, X. T.; Deng, X. Y.; Chen, J.; Liang, Q. M.; Zhang, K.; Li, D. L.; Wu, P. P.; Zheng, X.; Zhou, R. P.; Jiang, Z. Y.; Ma, A. J.; Chen, W. H.; Wang, S. H. Eur. J. Med. Chem. 2019, 189, 112013.
33. [33]
  Zhong, Y. Y.; Yu, L. J.; He, Q. Y.; Zhu, Q. Y.; Zhang, C. G.; Cui, X. P.; Zheng, J. X.; Zhao, S. Q. ACS Appl. Mater. Interfaces 2019, 11, 32769. doi: 10.1021/acsami.9b11754

图式 1 化合物C₁~C₉和D₁~D₉的合成路线

Scheme 1 Synthetic route of compounds C₁~C₉ and D₁~D₉

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图 1 化合物C₈ (a)和D₈ (b)抑制酪氨酸酶的机理

Figure 1 Inhibition mechanism of mushroom tyrosinase by C₈ (a) and D₈ (b)

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图 2 C₈ (a)和D₈ (b)的双倒数曲线

Figure 2 Lineweaver-Burk plots of C₈ (a) and D₈ (b)

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图 3 C₈和D₈与酪氨酸酶的分子对接

Figure 3 Docking of C₈ and D₈ with tyrosinase

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表 1 化合物对酪氨酸酶活性的抑制作用

Table 1. Inhibition of compounds on tyrosinase activity

Number	R¹	R²	IC₅₀/(µmol•L^－1)
C₁	H	H	＞200^a
C₂	CH₃	H	＞200^a
C₃	OCH₃	H	＞200^a
C₄	F	H	112.2±3.4
C₅	Cl	H	105.5±2.8
C₆	Br	H	＞200^a
C₇	CF₃	H	＞200^a
C₈	OH	H	10.7±0.7
C₉	OH	OCH₃	＞200^a
肉桂酸			201.4±5.3
曲酸			28.5±1.1
D₁	H	H	＞200^a
D₂	CH₃	H	＞200^a
D₃	OCH₃	H	＞200^a
D₄	F	H	78.4±3.2
D₅	Cl	H	76.5±3.1
D₆	Br	H	＞200^a
D₇	CF₃	H	＞200^a
D₈	OH	H	2.2±0.2
D₉	OH	OCH₃	＞200^a
香豆素			＞200^a
^a化合物浓度200 μmol•L^－1时, 酪氨酸酶抑制活性低于40%.

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通讯作者: 陈斌, bchen63@163.com

1.
沈阳化工大学材料科学与工程学院沈阳 110142